【摘 要】
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目的：构建动脉粥样硬化敏感近交系C57BL/6J小鼠ZFP580 3羧基端编码基因原核表达载体,为获得大量重组ZFP580 3羧基端蛋白并选择性亲和结合层析筛选随机寡核苷酸库,确定ZFP580所
【机 构】
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中国人民武装警察部队医学院生理学与病理生理学教研室
【出 处】
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2008年全国老年人常见疾病防治研讨会
论文部分内容阅读
目的：构建动脉粥样硬化敏感近交系C57BL/6J小鼠ZFP580 3羧基端编码基因原核表达载体,为获得大量重组ZFP580 3羧基端蛋白并选择性亲和结合层析筛选随机寡核苷酸库,确定ZFP580所调控的顺式作用元件DNA序列奠定基础。
方法：参照GENBANK公布的C57BL/6J小鼠ZFP580 cDNA序列,根据ZFP580 3羧基端编码基因cDNA序列设计一对引物,采用RT-PCR技术从C57BL/6J小鼠的肾脏组织中扩增ZFP5803羧基端编码基因cDNA序列,将PCR扩增的目的片段与载体pET42a(+)分别双酶切、回收纯化后做定向连接,BglⅡ、XhoI双酶切电泳筛选、鉴定并测序。
结果：用RT-PCR克隆得到ZFP580 3羧基端编码基因cDNA序列；双酶切pET42a-ZFP580,电泳分析插入片段长度为：255bp,与预期的结果一致,经连接点两端进行测序,测序结果显示接头两端序列连接正确。
结论：成功克隆ZFP580 3羧基端编码基因cDNA序列,并构建原核表达载体pET42a-ZFP580。此工作为进一步在动物整体、基因转录、蛋白表达水平阐明ZFP580基因对动脉粥样硬化发生、发展作用的研究工作提供了第一手实验材料。
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