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研究目的:慢性非可控性炎症作为肿瘤微环境的重要特征,被公认为是肺癌发生发展的主要危险因素。在研究中,我们观察天然产物EGCG对非小细胞肺癌C57A/B模型中肿瘤增长及转移的抑制作用,在此基础上利用差异蛋白建立蛋白蛋白相互作用网络,证实该网络中的枢纽蛋白为EGCG作用的抗肿瘤药物靶点,并研究EGCG通过该网络枢纽蛋白调节肿瘤细胞自噬性死亡的机制。方法:1,建立Lewis肺癌C57小鼠模型,并用EGCG 12.5,25,50 mg/(kg*day,i.g)三种剂量给药21天;2.用MPO方法检测肿瘤组织炎症微环境;3.利用2D-MS方法进行肿瘤组织中给药(EGCG 50mg/kg·day)前后的蛋白质谱分析,并确认12个差异蛋白;4.利用BUND基因数据库,以差异蛋白为种子蛋白建立肿瘤相关蛋白-蛋白相互作用网络,并利用Cytoscape软件对网络进行相关度及信号通路分析;5.利用CDOCKER软件及SPR方法预测并证实EGCG靶向性结合肿瘤炎性相关蛋白----中性粒细胞弹性蛋白酶(human neutrophil elastase,HNE)。6.利用Co-IP以及western Blot方法证实EGCG通过与14-3-3ε直接结合并影响其表达的机制引起细胞自噬性死亡。结果:1.EGCG显著性抑制Lewis肺癌肿瘤增殖(瘤体积EGCG 50mg/kg·day给药组相比空白对照组下降41.48%),肺组织转移灶数EGCG25mg/kg·day组相比空白对照组减少33.3%。2.EGCG显著性抑制肿瘤炎性微环境。3.2D-MS方法检测到12种蛋白给药前后发生稳定的显著性变化,网络药理学分析发现14-3-3 epsilon是该肿瘤炎症相关蛋白-蛋白相互作用网络中的核心枢纽蛋白。4.CDOCKER虚拟对接模型结果显示EGCG与HNE的结合能为-29.7089,接近于受体蛋白内源性配体与受体的结合能(结合能低于-25代表受体配体之间有相互作用)。5.SPR方法证实EGCG可以结合HNE,酶活性实验结果显示EGCG与HNE的结合可以抑制HNE的生物学活性。7.EGCG与14-3-3 eplison直接结合,并下调其蛋白表达,导致Beclin-1的释放,从而诱导A549细胞自噬的发生。结论:EGCG在体内显著性抑制非小细胞肺癌的增殖、转移以及肿瘤炎症微环境的发生发展。2D-MS方法以及后期的网络药理学分析证实12种差异蛋白可能与肿瘤增殖及肿瘤相关炎症发生相关。EGCG可以与肿瘤炎症相关因子HNE结合并抑制其活性。EGCG与14-3-3 eplison直接结合,并下调其蛋白表达,导致Beclin-1的释放,从而导致A549细胞的自噬性细胞死亡。