论文部分内容阅读
目的：研究miR-146a在人正常及LPS刺激hDPCs的表达及其对LPS环境中hDPCs表达炎症因子的影响；制备miR-146a/bFGF凝胶,探讨其对LPS环境中hDPCs增殖及成牙本质分化能力的调控作用.方法：①RT-PCR测定1μg/ml LPS刺激不同时间hDPCs中miR-146a的表达水平.②miR-146a mimics,miR-146a inhibitor及其相应小RNA对照分别转染hDPCs24h,1μg/ml LPS刺激hDPCs 4h,RT-PCR检测IL-6、IL-8mRNA的表达,ELISA检测细胞上清IL-6、IL-8的分泌；western blot检测IRAK1及TRAF6的蛋白表达水平.③将制备好的miR-146a、bFGF、miR-146a/bFGF凝胶分别与hDPCs共培养4d,第3d时以1μg/ml LPS刺激4h,CCK8检测各组凝胶对hDPCs在LPs环境下增殖能力的影响,各组矿化诱导培养7d、14d,western blot检测成牙本质分化标记物DSP及DMP1蛋白表达的变化；矿化诱导14d,茜素红染色检测矿化结节的形成.结果：①miR-146a在正常hDPCs中表达,1μg/ml LPS刺激hDPCs后表达上调,24h内表达量呈时间依赖性升高.②1μg/ml LPS明显促进hDPCs分泌IL-6和IL-8 (P＜0.05)；转染miR-146a mimics的hDPCs在LPS刺激后IL-6、IL-8 mRNA及上清中的IL-6、IL-8分泌蛋白表达均低于mimics control组(P＜o.05),同时IRAK1及TRAF6的蛋白表达量明显下调.③LPS处理对hDPCs增殖有一定抑制作用,miR-146a/bFGF凝胶可促进hDPCs增殖(P＜0.05)；miR-146a/bFGF凝胶可上调LPS刺激下hDPCs中DMP1及DSP蛋白的表达(P＜0.05)；茜素红染色显示miR-146a/bFGF凝胶组较对照和其他处理组矿化结节形成明显增多.结论：miR-146a在LPS刺激的hDPCs表达上调,转染miR-146a下调IRAK1及TRAF6表达并降低IL-6、IL-8分泌,提示miR-146a参与hDPCs的炎症反应调控；miR-146a/bFGF凝胶能促进hDPCs在1μ g/ml LPS刺激下的增殖与成牙本质向分化.