【摘 要】
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目的：探讨PERK-EIF2α通路在丹参二萜醌诱导肺癌PC9细胞凋亡中的作用.
方法：采用0、2.5、5.0、7.5μg/mL丹参二萜醌处理PC9细胞24h后,CCK8法、Annexin V-FITC/PI双染色法分
【机 构】
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浙江中医药大学附属第一医院,杭州310006;浙江中医药大学,杭州310053浙江中医药大学,杭州310053
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目的：探讨PERK-EIF2α通路在丹参二萜醌诱导肺癌PC9细胞凋亡中的作用.
方法：采用0、2.5、5.0、7.5μg/mL丹参二萜醌处理PC9细胞24h后,CCK8法、Annexin V-FITC/PI双染色法分析细胞增殖活性及凋亡情况：Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2,PERK-EIF2α通路相关关键蛋白,以及下游CHOP、ATF4蛋白表达水平;PERKsiRNA转染PC9细胞,Western blot检测PERK蛋白的转染结果,筛选出干扰效果最佳的片段.Annexin V-FITC/PI双染色法检测沉默PERK基因后丹参二萜醌对PC9细胞的凋亡情况,Western blot分析PERK-EIF2α通路相关关键蛋白的表达情况.
结果：随着丹参二萜醌浓度的增加,PC9细胞增殖抑制作用增加,凋亡率显著增高(P<0.05);随着时间延长PERK、EIF2α蛋白磷酸化水平明显增加,且以8h增加最为明显(P<0.05);其下游蛋白ATF4表达量逐渐减低,CHOP逐渐增高,呈剂量依赖性.PERK蛋白干扰后研究得到与干扰前相反的结果：与空载体组比较,丹参二萜醌诱导PC9细胞凋亡被明显抑制(P<0.05);PERK、EIF2α蛋白磷酸化水平明显降低(P<0.05),ATF4表达量有所增加,CHOP有所降低.
结论：丹参二萜醌可触发PC9细胞内质网应激,其诱导细胞凋亡的机制与激活PERK/EIF2α通路密切相关.
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