【摘 要】
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Sec途径(分泌途径,Secretion pathway)是蛋白质转运的主要途径。其中,SecA ATPase是蛋白质转运途径中的“动力泵”,它通过ATP的水解循环驱使蛋白质前体穿过细菌内膜。为了研究中华绒螯蟹螺原体分泌蛋白的功能,我们克隆了SecA这个基因,分析核酸序列可知其开放阅读框(ORF)为2391bp,编码796个氨基酸,SecA重组蛋白在大肠杆菌BL21表达载体中表达。本实验运用Pul
【机 构】
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南京师范大学生命科学学院水生甲壳动物疾病重点实验室,江苏省生物多样性和生物技术重点实验室,中国江苏省南京市栖霞区仙林街道文苑路1号,210023
【出 处】
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第十届世界华人虾蟹养殖研讨会暨2016年中国河蟹产业发展高峰论坛
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Sec途径(分泌途径,Secretion pathway)是蛋白质转运的主要途径。其中,SecA ATPase是蛋白质转运途径中的“动力泵”,它通过ATP的水解循环驱使蛋白质前体穿过细菌内膜。为了研究中华绒螯蟹螺原体分泌蛋白的功能,我们克隆了SecA这个基因,分析核酸序列可知其开放阅读框(ORF)为2391bp,编码796个氨基酸,SecA重组蛋白在大肠杆菌BL21表达载体中表达。本实验运用Pull-down技术,筛选SecA ATPase与螺原体体内的互作蛋白,进行SDS-PAGE电泳分离SecA和互作蛋白,切胶回收互作蛋白进行质谱鉴定、蛋白测序以筛选互作的毒力蛋白,得到的互作蛋白为GAPA(甘油醛-3-磷酸脱氢酶)。为了研究其在侵染及免疫方面的功能,本实验克隆了GAPA这个基因,分析核酸序列可知其开放阅读框(ORE)为999bp,编码332个氨基酸,GAPA重组蛋白在大肠杆菌BL21表达载体中表达。据其它文献报道,GAPA是糖酵解反应中的一个酶,在多种细菌和真核生物中被发现该蛋白分部在细胞膜上,在某些情况下,已经被证明GAPA有助于入侵宿主组织。
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