【摘 要】
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采用GUS组织化学染色和PCR方法对T-DNA插入突变群体进行筛选,并对基因捕捉效率和T-DNA整合的时空特性进行了分析.结果表明:直接分化再生系统和愈伤组织分化再生系统的转化效
【机 构】
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中国热带农业科学院热带生物技术国家重点实验室热带生物技术研究所,海口,571101
【出 处】
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2006年中国园艺学会观赏园艺专业委员会年会
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采用GUS组织化学染色和PCR方法对T-DNA插入突变群体进行筛选,并对基因捕捉效率和T-DNA整合的时空特性进行了分析.结果表明:直接分化再生系统和愈伤组织分化再生系统的转化效率分别为64％和37.5％,前者比已报道的采用基因枪法转化同种材料的转化效率(34.5％)高出近2倍.植株总的基因捕捉频率为12.2％.其中根、短缩茎、叶、外植体、愈伤组织的基因捕捉频率分别为13.2％、34.3％、4.3％、0.9％、40％.在GUS检测呈阳性的植株中,有很多为特异性表达的,其中短缩茎、根、叶的特异性表达率分别为50％、8.6％、30％.从特异性表达的根、茎、叶的横切面组织切片可以看出,GUS活性主要在根、茎、叶的表皮、皮层薄壁细胞以及叶的表皮、皮层薄壁细胞和海绵组织薄壁细胞中表达.在侵染后的第26天,根本检测不到蓝色斑点,然而到了第35天就可以检测到微弱的蓝色斑点,此后逐渐增强.推测T-DNA整合到百合基因组的时间是在侵染后35天之前,T-DNA在百合基因组中开始表达的时间可能是在侵染后27～35天.
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