【摘 要】
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以北美株猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染性克隆(pCBC)为平台进行反向遗传操作,分别在pCBC的ORF2和ORF3间,ORF5和ORF6间,ORF6和ORF7间插入PCV2的ORF2,依次获得三个嵌合克
【机 构】
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中国农业科学院上海兽医研究所,动物传染病研究室,农业部动物寄生虫病重点实验室,上海,200232
【出 处】
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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会
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以北美株猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染性克隆(pCBC)为平台进行反向遗传操作,分别在pCBC的ORF2和ORF3间,ORF5和ORF6间,ORF6和ORF7间插入PCV2的ORF2,依次获得三个嵌合克隆(pCPV,p6PC,p7PC)。转染PRRSV易感细胞MARC-145后得到三个重组病毒,重组病毒在体外培养的共性:遗传不稳定性。继而以重组病毒vCPV为例,利用RT-PCR技术在转录水平对重组病毒的遗传不稳定性进行了分析。结果发现:vCPV的SgmRNA2.1利用了PRRSV基因组2的TRS,但随着病毒的传代SgmRNA2.1中的PCV序列处在不断删减中；SgmRNA2.2和SgmRNA2.3采用PCV上的序列作为TRS,来取代PRRSV ORF2本身的TRS；SgmRNA2.4为非典型亚基因组,其TRS与PRRSV ORF2的起始密码子间隔37个碱基,在起始密码子下游.由此推测:插入片断上一些类似TRS序列的引入及插入过长片断(718bp)导致PRRSVORF2的TRS本身和两翼序列的RNA结构变化是引起重组病毒遗传不稳定性的最主要原因。
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