论文部分内容阅读
肝糖原磷酸化酶(hepatic glycogen phosphorylase,GP)和葡萄糖-6-磷酸酶(glucose-6-phosphatase,G6Pase)是糖代谢过程中两个限速酶,也是新型降血糖药物开发的重要靶点。黄芪甲苷具有降血糖的作用,但是其降血糖的分子作用机制还不明确。目的:研究黄芪甲苷对高脂饮食联合化学药物链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)诱导C57BL/6J小鼠糖尿病模型降血糖作用及对肝糖原磷酸化酶和葡萄糖-6-磷酸酶的作用。方法及结果:1、采用高脂饮食联合STZ诱导C57BL/6J糖尿病小鼠模型,评价不同剂量(12.5mg/kg,25mg/kg,50mg/kg)黄芪甲苷对糖尿病小鼠血糖、体重、总胆固醇、甘油三酯和胰岛素水平的影响。结果表明25mg/kg和50mg/kg黄芪甲苷能显著降低糖尿病小鼠的血糖、体重、甘油三酯和胰岛素水平,但对总胆固醇水平影响不大。2、采用体外酶活性检测方法,检测黄芪甲苷对糖代谢途径的两个关键酶肝糖原磷酸化酶和葡萄糖-6-磷酸酶的影响。分离小鼠肝脏,称取100mg立即投入预冷的0.25M的蔗糖溶液中,在4℃匀浆后用蔗糖溶液加至总体积2ml,混悬液在4℃,12000g离心30分钟,取上清液采用葡萄糖-6-磷酸脱氢酶偶联反应测定GP和G6Pase的活性,结果表明25mg/kg和50mg/kg黄芪甲苷能降低GP和G6Pase的活性(P<0.05)。3、用实时定量PCR法检测黄芪甲苷对GP和G6Pase的mRNA表达的影响。小鼠肝脏上清液提取方法如前,结果表明25mg/kg和50mg/kg黄芪甲苷能减少GP和G6Pase的mRNA表达(P<0.05)。4、用Western blot法检测黄芪甲苷对GP和G6Pase的蛋白表达的影响。结果表明25mg/kg和50mg/kg黄芪甲苷能减少GP和G6Pase的蛋白表达(P<0.05)。结论:黄芪甲苷能降低高脂联合STZ诱导的糖尿病小鼠的血糖、体重、甘油三酯和胰岛素水平,其降血糖作用机制可能与抑制糖代谢过程中的两个限速酶,肝葡萄糖磷酸酶和葡萄糖-6-磷酸酶有关。