【摘 要】
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目的:探讨艳山姜挥发油(EOFAZ)对高糖(HG)诱导大鼠视网膜Müiller细胞(RMCs)增生的保护作用,并探讨其可能的作用机制,为临床上糖尿病视网膜病变㈣的防治提供新的理论指导和实
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目的:探讨艳山姜挥发油(EOFAZ)对高糖(HG)诱导大鼠视网膜Müiller细胞(RMCs)增生的保护作用,并探讨其可能的作用机制,为临床上糖尿病视网膜病变㈣的防治提供新的理论指导和实验基础。方法:传代培养RMCs,以HG(30 mM,48 h)诱导RMCs建立细胞增殖模型,实验分为7组,即空白对照组(Control)、甘露醇组(mannitol,24.5 mM)、高糖组(HG,30mM))、EOFAZ低剂量组(0.25μg/L)、中剂量组(0.5μg/L)、高剂量组(1μg/L)、罗格列酮阳性药组(RGZ,20μM)。部分实验另设钙依赖调节蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)抑制剂KN 93(5μM)组。RMCs用EOFAZ或RGZ预保护1小时后,再加入HG共同孵育48 h,用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐法(MTT)检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞周期;免疫印记分析方法分析CaMKⅡ、细胞增生标志物胶质纤维酸蛋白(GFAP)、血管内皮生长因子(VEGF)的蛋白表达水平,以及采用免疫荧光检测GFAP表达,。结果:MTT结果显示,与空白组对比,HG作用后细胞增殖明显(p<0.01),EOFAZ或RGZ预保护后,显著抑制RNCs的异常增殖(p<0.01);细胞周期结果显示,EOFAZ高剂量能够显著抑制高糖诱导s期所占比例的增加;免疫印迹分析、免疫荧光结果显示,EOFAZ可显著降低HG诱导CaMKⅡ、GFAP和VEGF的蛋白异常上调(p<0.01),给以KN 93后可显著下调CaMKⅡ、VEGF和GFAP的表达,其中联用EOFAZ后与单独EOFAZ组比较无明显差异。结论:EOFAZ可能是通过抑制CaMKⅡ信号从而改善HG诱导的Müller细胞增生,从而发挥对DR的保护作用。
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