猪圆环病毒是迄今发现的最小的病毒之一,现已知它包括PCV1和PCV2两个血型,其中PCV2是致病性病毒。PCV2主要引起断奶仔猪多系统衰竭综合症,它还与猪呼吸道综合症、先天性震颤、猪皮炎与肾炎综合症、肠炎以及繁殖障碍等疾病的发生有关。猪圆环病毒现已成为世界范围内危害养猪业最大的病原体之一,因此PCV2的早期诊断对于PCV2的防控至关重要。本研究针对检测中用到的单克隆抗体还处于利用杂交瘤细胞制备的繁琐阶段,利用噬菌体展示技术对猪圆环病毒Ⅱ型噬菌体抗体文库做了初步研究。本研究就是将PCV2的ORF2区的基因表达成蛋白作为免疫原免疫3只小鼠,当抗PCV2的血清效价达到105时,取效价较好的小鼠,取其脾脏,用RNA提取试剂盒提取RNA,并反转录成c DNA,以c DNA为模板扩增抗体的VH和VL片段,其中VH和VL的片段大约300bp到400bp之间。利用重叠延伸PCR将VH与VL用(Gly4ser)3多肽连接起来构建成sc Fv片段,在两端分别加上sfiⅠ和NotⅠ酶切位点,将噬菌粒载体PCANTAB-5e用sfiⅠ和NotⅠ酶切后与sc Fv连接在一起,构成重组载体转入到大肠杆菌TG1的感受态中,菌液PCR、质粒PCR以及酶切鉴定转化结果。随后用辅助噬菌体M13K07辅助感染构成噬菌体文库。SDS-PAGE、ELISA等鉴定结果显示:PCV2的ORF2融合蛋白26KD,三只小鼠效价均达到10-5,总RNA提取完整,目的条带VH和VL显示正确,菌液PCR、重组质粒PCR以及酶切鉴定结果显示转化成功。本研究结果证明针对猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)噬菌体文库构建成功,为PCV2基因工程抗体的制备以及病毒的检测奠定了基础。