【摘 要】
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目的：蛋白二巯基异构酶(Protein-Disulphide Isomerase,PDI)在内质网腔中的含量最高,具有分子伴侣的活性,能抑制错误折叠蛋白的聚集,对机体起到一定的保护作用.本试验通过
【机 构】
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中国医科大学公共卫生学院环境卫生学教研室,辽宁沈阳110001
【出 处】
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中国毒理学会生化与分子毒理专业委员会学术会议暨环境内分泌干扰物的毒理学研究新技术新方法研讨会
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目的：蛋白二巯基异构酶(Protein-Disulphide Isomerase,PDI)在内质网腔中的含量最高,具有分子伴侣的活性,能抑制错误折叠蛋白的聚集,对机体起到一定的保护作用.本试验通过观察一氧化氮合成酶(Nitric oxide synthase,NOS)的抑制剂L-刀豆氨酸硫酸盐对锰(Manganese,Mn)致PDI活性及其表达的影响,探讨亚硝基化在锰致PDI活性改变中的作用.方法：以出生4-7天Wistar脑片为模型,待脑片生长至最佳状态时,进行分组实验.实验分4组分别为对照组,正常DMEM培养液；锰处理组,含400 μM锰的DMEM培养液；低剂量L-刀豆氨酸硫酸盐预处理组,用0.5mML-刀豆氨酸硫酸盐预处理脑片12h后,再用含400 μM锰的DMEM培养液；高剂量L-刀豆氨酸硫酸盐预处理组,用2mML-刀豆氨酸硫酸盐预处理脑片12h后,再用含400μM锰的DMEM培养液.37℃孵育24h.检测下列指标：PDI蛋白活性,PDI的基因和蛋白表达,以及PDI亚硝基化情况,NO生成量、诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)活性.结果：锰处理组脑片神经细胞iNOS活性与对照组比较,明显升高了2.64倍,培养液中NO含量也升高了4.02倍.同时,锰诱导PDI的mRNA和蛋白表达及其亚硝基化水平均明显升高,但是其活性却明显降低了46.06％.与锰处理组比较,不同浓度L-刀豆氨酸硫酸盐预处理组神经细胞iNOS活性和培养液中NO含量均逐渐下降,2mM L-刀豆氨酸硫酸盐预处理组神经细胞iNOS活性和培养液中NO含量达到最低.2mM L-刀豆氨酸硫酸盐预处理组神经细胞亚硝基化PDI蛋白明显下降了22.97％；而PDI的mRNA和总蛋白表达无明显改变,同时PDI的蛋白活性也得到部分恢复.结论：锰诱导产生大量NO,造成神经细胞内PDI蛋白亚硝基化,影响其正常功能；L-刀豆氨酸硫酸盐可以减轻锰所致的PDI蛋白亚硝基化水平,对锰致神经细胞损伤起到保护作用.
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