吲哚胺2,,3-双加氧酶在BMSCs对初始T细胞向Th17/Treg细胞分化中的作用及机制

来源 :2013年全军烧伤外科学术年会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:julia_203
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  目的 初步验证吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)在BMSCs对初始CD4+T细胞向Th17/Treg细胞分化的影响及其可能机制.方法 分离培养Balb/c小鼠来源的BMSCs,以Balb/c小鼠脾脏来源的CD4+T细胞为反应细胞,以丝裂霉素预处理过的C57BL/6小鼠脾脏细胞作为刺激细胞.实验分为3组:对照组,刺激细胞+反应细胞;BMSCs组,刺激细胞+反应细胞+BMSCs; IDO拮抗组,刺激细胞+反应细胞+BMSCs+D-1-MT.通过BrdU染色法检测T细胞增值情况,流式细胞技术分析Th17/Treg细胞比例,通过ELISA检测培养体系中IL-6、TGFβ 1、IL-10及IL-17的水平变化.结果 (1)分别于12 h,24 h,48 h分别检测反应细胞增殖情况,BMSCs组处于增殖期的细胞比例分别为(4.0±1.8)%、(4.2±1.5)%、(3.3±0.6)%较对照组(9.1±2.7)%、(10.2±2.2)%、(8.2±2.5)%明显降低(t值分别5.935、7.676、6.785,P值均小于0.01),而IDO拮抗组(8.1±1.3)%、(8.6±2.4)%、(8.5±2.2)%较BMSCs组明显增高(t值分别8.665、5.720、7.609,P值均小于0.01);(2)培养48 h后检测体系中Th17/Treg细胞比例,BMSCs组Tregs细胞比例为(8.0±0.61)%,显著高于对照组(1.9±0.72)%(t =12.90,P<0.01),IDO拮抗组Tregs细胞比例为(3.2±1.0)%,较BMSCs组明显降低(t=9.185,P<0.01);BMSCs组Th17细胞比例为(3.0±1.0)%,较对照组9.1±2.2%明显降低(t=8.432,P<0.01),IDO拮抗组Th17细胞为(7.9±1.9).%,较BMSCs组明显增高(t=7.088,P<0.01); (3) BMSCs组培养上清液中IL-6、TGFβ1、IL-10及IL-17分别为190.7±25.0pg/ml、581.3±44.1pg/ml、256.8±38.5pg/ml、983.7±113.Spg/ml,其中IL-6及IL-17均低于对照组(t值分别29.54、32.13,P值均小于0.01),而TGFβ 1及IL-10则显著高于对照组(t值分别25.74、23.18,P值均小于0.01),而IDO拮抗组IL-10及IL-17分别为120.6±24.1pg/ml、491.0±43.9pg/ml,较BMSCs组有明显差异性(t值分别28.52、19.1,P值均小于0.01).结论 通过D-1-MT拮抗IDO功能后发现,BMSCs对Th17/Treg细胞分化的影响明显降低,提示IDO在BMSCs对Th17/Treg细胞分化中可能具有重要作用.
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