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目的:建立毒死蜱间接ELISA检测方法。
方法:以毒死蜱原药与3-巯基丙酸为起始原料,合成半抗原并对其进行结构鉴定。利用该半抗原与牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联制备毒死蜱人工免疫抗原和包被抗原,再取已免疫的经过筛选的Balb,c小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,用间接ELISA和间接竞争ELISA方法对2株细胞进行鉴定,并测定与其它农药的交叉反应率。
结果:获得两株稳定分泌毒死蜱单克隆抗体的细胞株,初步建立了毒死蜱间接EUsA检测方法,其检测范围为0.04-0.42μg/mL,半数抑制浓度(IC50)为0.135μg/mL,最低检测限为0.03μg/mL,与杀螟硫磷、对硫磷和马拉硫磷几乎没有交叉反应。
结论:成功制备两株分泌毒死蜱抗体的单克隆细胞株,初步建立了毒死蜱间接ELISA检测方法。