菠萝高代离体培养植株生物学性状的观察

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因外植体材料本身的细胞异质性以及培养过程中细胞变异(DNA序列改变、表观遗传变异)等原因导致再生植株表型发生变化在植物离体培养中是一个普遍存在的现象。这些变异既是离体快速繁殖时需要尽量避免的,又是体细胞无性系选育的基础材料。对于菠萝再生植株的性状变异情况还缺少研究报道。菠萝属植物高度自交不亲和,自然状态下和生产中都是利用芽体繁殖更新。然而,菠萝杂合程度高,组织中的细胞异质性也较明显,再生植株出现变异频率较高。本研究中对由高代愈伤组织(8年左右)经体细胞胚再生植株的变异情况进行了观测比较,以期为菠萝植物离体快速繁殖、体细胞胚无性系获得提供参考依据。2008年4月,以‘神湾’菠萝(Ananas comosus‘Shenwan’)吸芽叶基为材料,在MS+2.0 mg·L-1BA+2.5 mg·L-1 NAA培养基上诱导产生愈伤组织,随后转移到MS+3.0 mg·L-1 BA+2 mg·L-1NAA上培养增殖继代8年96代;2016年4月再转移至MS+5 mg·L-1 2,4-D+0.5 mg·L-1 BA上诱导体细胞胚,暗培养20 d后,转移至光下培养;最后在MS+0.5 mg·L-1 BA+3 mg·L-1 NAA上成苗,将高7 cm以上的幼苗移到室外炼苗1周,盆栽至15~20 cm时(2016年10月)定植于华南农业大学菠萝资源圃,同时以‘神湾’吸芽苗为对照。栽培中少肥、不使用乙烯利和赤霉素等。随着植株生长发育,一些高代离体培养再生植株在生长发育、形态特征、开花结实等方面出现了下列变异性状。(1)生长较旺盛:平均株高74.4 cm、平均冠幅122.6 cm,而对照为42.3 cm和87.8cm;(2)营养生长期明显缩短:约5%植株于2017年3月自然开花,约10%植株2017年12月开花,其他85%植株全部在2018年4月开花,而对照到2018年4月仍只有8%自然开花;(3)植株体表较光滑:鳞片是菠萝叶表面最典型结构,白色、蜡质密布于植物体表面(尤其是叶背),主要起减少气孔水分散失的作用,约15%的再生植株叶、苞片、萼片等变得光滑,鳞片极少;(4)叶缘刺减少:30%的再生植株叶缘刺减少,5%再生植株的叶片基本无刺,而对照叶缘密生刺状锯齿;(5)花柱异常:约90%的植株花柱有不同程度退化现象,如花柱缩短(长度减少1/5~2/3)、柱头退化、柱头不裂或浅裂等,而对照的花柱略高于花药、柱头3裂;(6)冠芽增多:5%的植株有5个及以上的冠芽,对照冠芽均为1个;(7)果眼较浅:果眼深度8.07~12.35 mm,平均10.26 mm,而对照为9.69~13.25 mm,平均10.78 mm;(8)其他:再生植株中还出现了叶片颜色白绿嵌合体植物、锥形果等一些频率极低的现象。以上异常情况在低代(15代以下)离体繁殖植株中出现频率要低得多,总异常率低于2%,培养时期越长、培养基等培养环境越极端,异常频率会越高。多数异常性状(尤其是数量性状)属于饰变,经吸芽繁殖后这些异常性状一般会恢复正常。
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