阮病毒病是一类致死性神经退行性疾病，包括人的克雅氏病，绵羊痒病和鹿的慢性消耗性疾病等。阮病毒病发生的机制是动物体内正常的阮蛋白(PrPsc)转变成异常的致病性阮蛋白(PrPsc)，两者仅分子构象存在差异。本研究对传统的蛋白表达方法进行了改良，采用定点突变的方法对表达载体上游的的酶切位点进行消除，最大限度的克服了这一缺点。采用改良后的蛋白表达方法对牛、羊、人、兔、大、仓鼠六种阮蛋白进行了表达、纯化及复性。设计特定引物通过PCR方法获得带有酶切位点的牛、兔等这六种动物肮蛋白DNA序列，将该序列连接到pPROEX-htb质粒上，再通过定点突变技术除去表达载体中目的基因之前的多余酶切位点，获得这六种动物的阮蛋白全真表达载体。将该载体转入大肠杆菌，并对诱导表达的条件进行优化，使其高效表达。诱导表达后的菌液经12000rpm，15分钟离心，收集沉淀，在沉淀中加入200mL结合缓冲液，超声破碎后通过1OmL镍-NTA琼脂糖树脂层析柱进行纯化，纯化后的蛋白装入截留10kD分子量大小的透析袋中，然后浸泡在复性液中，复性液尿素的浓度由8M逐渐过渡至OM，透析袋中的液体经过I2000rpm, 30分钟离心，上清即为复性后的蛋白，用TEV蛋白酶切除his-tag，除去切下的his-tag及TE V蛋白酶即得到高纯度重组阮蛋白。分别用阮蛋白单抗AH6、3F4进行Western Blotting鉴定，在25kD附近有明显的单一条带，表明复性后的阮蛋白大小正确，并具有良好的免疫反应原性。将复性后的肮蛋白接种家兔，制备多克隆抗体，分别用ELISA和Western Blotting检测血清中肮蛋白抗体，结果表明本实验得到的全真表达的阮蛋白比传统方法表达的玩蛋白有更好的免疫原性。