【摘 要】
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从分泌抗狂犬病病毒糖蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞中提取纯化总RNA,经RT-PCR扩增抗体轻、重链可变区基因,SOE-PCR扩增单链抗体基因(ScFv),将ScFv基因亚克隆入原核表达载体pET
【机 构】
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军事医学科学院军事兽医研究所,吉林,长春,130062
【出 处】
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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会
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从分泌抗狂犬病病毒糖蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞中提取纯化总RNA,经RT-PCR扩增抗体轻、重链可变区基因,SOE-PCR扩增单链抗体基因(ScFv),将ScFv基因亚克隆入原核表达载体pET-28a(+),转化E.coli DH5α,特异性PCR及酶切鉴定重组质粒,阳性质粒转化表达宿主菌E.coli BL-21,IPTG诱导表达目的蛋白,SDS-PAGE检测目的蛋白表达,ELISA检测ScFv与病毒感染细胞结合活性。结果：成功克隆了ScFv基因,其排列方式为VL-linker-VH.序列分析表明:ScFv基因全长693pb,VH基因全长315bp,VL基因全长333bp.限制性酶切图谱及序列分析证实成功构建了ScFv原核表达质粒,经IPTG诱导,目的蛋白获得高效表达,表达量占菌体总蛋白的31％。连续梯度透析复性后,可溶蛋白浓度为600μg/mL.ELISA结果表明:ScFv与病毒感染细胞具有良好的结合活性。
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