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目的:利用组织工程学技术实现牙髓牙本质复合体的再生是目前牙髓治疗的新方向,而种子细胞和支架材料是其中的两大核心要素.本实验采用牙髓干细胞和胶原支架材料进行三维复合培养,以期在体内体外构建出组织工程化牙髓.
方法:采用酶消化法体外培养成人牙髓干细胞,通过免疫荧光染色和流式细胞术鉴定干细胞表面特异性抗原.将成人牙髓干细胞接种于细胞外基质胶原支架材料中,建立体外牙向分化诱导的三维培养体系,采用倒置相差显微镜、cck8、流式细胞术和qPCR等方法分别检测细胞在胶原支架材料中的形态、增殖、凋亡和分化情况.将牙髓干细胞-胶原支架复合体植入SD大鼠背部皮下,取样后进行HE染色及DSPP免疫组化染色,以观察牙髓组织的新生情况.
结果:成人牙髓干细胞Stro-1,CD146表达阳性,CD34,CD45表达阴性,具有间充质干细胞的表面标志特性。胶原支架材料具有良好的生物相容性,支持牙髓干细胞的增殖与牙向分化。牙髓干细胞-胶原支架复合体可以在大鼠体内形成牙髓牙本质样的组织结构。
结论:利用牙髓干细胞-胶原支架复合体制备组织工程化牙髓具有一定的可行性。