【摘 要】
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目的 构建大鼠微小RNA-1重组慢病毒表达载体,稳定转染L6成肌细胞,观察微小RNA-1过表达对其增殖分化及组蛋白去乙酰化酶(HDAC4)表达水平的影响.方法 构建表达含微小RNA-1
【出 处】
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全国手部功能重建研讨会、中华医学会手外科学分会华北地区第十届手外科学术会议暨内蒙古自治区第三届手外科学术会议
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目的 构建大鼠微小RNA-1重组慢病毒表达载体,稳定转染L6成肌细胞,观察微小RNA-1过表达对其增殖分化及组蛋白去乙酰化酶(HDAC4)表达水平的影响.方法 构建表达含微小RNA-1的重组慢病毒载体,并进行测序和酶切鉴定,稳定转染L6细胞后,用逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR,Taqman探针)的方法检测微小RNA-1的表达水平；细胞计数实验(CCK-8试剂盒)评价微小RNA-1过表达后对L6细胞增殖的影响.诱导稳定转染的L6成肌细胞进行分化,观察微小RNA-1过表达后对L6细胞分化的影响.以Western blot法检测微小RNA-1过表达后,HDAC4表达水平的变化.结果 微小RNA-1慢病毒载体经酶切和测序鉴定正确,转染48h后,L6细胞微小RNA-1表达显著上调(P＜0.01),细胞计数实验表明L6细胞增殖无显著变化,细胞分化实验显示,过表达微小RNA-1的L6细胞分化明显.HDAC4的表达水平明显下降.结论 1.成功构建微小RNA-1慢病毒表达载体,稳定转染L6成肌细胞后高效表达微小RNA-1,促进了L6成肌细胞的分化,对增殖无明显影响.其机制与抑制HDAC4的表达相关.2.微小RNA-1过表达促进L6成肌细胞分化,为下一步体内实验提供了有力的证据,为失神经萎缩的防治提供重要靶点.
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