论文部分内容阅读
目的 构建具有跨BBB及脑部肿瘤病灶靶向性的双功能脂质体,并对其性质、体内外靶向性及体内外治疗效果进行研究.方法 对于脑肿瘤靶向性药物递送,主要存在两个亟待解决的问题：BBB对其入脑的障碍；跨BBB后载体较差的病灶选择性.针对以上两个关键性问题,构建了穿膜肽TAT和作用于转铁蛋白受体(TfR)的短肽T7共修饰的双配脂质体(T7-TAT-LIP).采用薄膜分散-超声法制备脂质体,TAT与T7 分别通过DSPE-PEG1000-TAT和DSPE-PEG2000-T7组装到脂质体的表面.采用激光粒度仪、TEM等手段对制备的载体进行表征,同时采用流式细胞仪、激光共聚焦显微镜、小动物活体成像仪等手段进行体内外的脑肿瘤靶向性验证,通过MTT法、荷瘤小鼠生存期考察及脑部病理切片观察等方法对载阿霉素脂质体DOX-T7-TAT-LIP的体内外治疗效果进行评价.结果 所得T7-TAT-LIP粒径为118±0.76 nm,PDI为0.204±0.09,Zeta电位为-6.32±2.0 mV；载阿霉素双配脂质体DOX-T7-TAT-LIP粒径为115.3±1.47 nm,PDI为0.223±0.04,Zeta电位为-6.51±2.08,包封率为93.2±1.54％.两者24h内血清稳定性良好.体外跨BBB模型实验结果表明,T7-TAT-LIP能有效地跨过BBB模拟层(bEnd.3细胞层)被脑肿瘤细胞C6摄取.C6细胞对该双配修饰脂质体摄取值较单配修饰的脂质体TAT-LIP和T7-LIP分别提高了4.43倍、12.27倍.体内分布实验结果表明,T7-TAT-LIP在脑肿瘤处的蓄积明显高于单配修饰的脂质体和PEG脂质体.体内荷脑胶质瘤小鼠的治疗效果评价结果表明,DOX-T7-TAT-LIP能显著抑制脑部肿瘤的生长,能显著延长小鼠的生存期：生存期较游离阿霉素组延长21天,较DOX-LIP延长17天,较DOX-TAT-LIP延长15天,较DOX-T7-LIP延长8天.结论 成功构建了同时具有高效跨BBB和特异性蓄积于脑胶质瘤深部特点的T7-TAT-LIP、DOX-T7-TAT-LIP.体内外均表现出了优越的脑胶质瘤靶向性及治疗效果.该载体能在跨过血脑屏障后特异性的靶向到脑部肿瘤区域：首先,T7能在循环过程中特异性地靶向到TfR高表达的脑毛细血管内皮细胞,接着TAT发挥其穿膜作用使载体跨过BBB,载体进入脑后又借助T7靶向到TfR高表达的脑肿瘤区域,实现双级靶向.