【摘 要】
：
本研究应用已构建好的EIAV驴白细胞弱毒疫苗株的感染性分子克隆载体(pOK8266)为模板,通过SOEPCR方法在感染性分子克隆载体的S2基因独特区内引入突变点,形成含有酶切位点(NspV
【机 构】
：
莱阳农学院,山东青岛 265200
论文部分内容阅读
本研究应用已构建好的EIAV驴白细胞弱毒疫苗株的感染性分子克隆载体(pOK8266)为模板,通过SOEPCR方法在感染性分子克隆载体的S2基因独特区内引入突变点,形成含有酶切位点(NspV)的突变体(P1P4)。将突变体(P1P4)亚克隆至pBluescript SK(M13-)质粒,形成pB-P1P4中间载体;人工合成2条6个组氨酸的引物,作为标签,将其插入pB-P1P4中间载体的NspV位点,形成带标签的中间载体;用ApaI酶切pOK8266和中间载体,连接转化,构建带标签的重组感染性分子病毒克隆载体(EIAV-p8.2-HIS),经PCR、酶切和测序表明,6个组氨酸已插入pOK8266的S2基因内。分别转染驴皮肤细胞(FDD)和驴白细胞,将转染驴皮肤细胞收获物传至第六代,电镜下未观察到EIAV病毒;而将转染驴白细胞收获物传代至第六代时,电镜下观察到了典型的病毒粒子。提取前病毒DNA,PCR扩增P1P4片段,亚克隆至pMD18-T载体,测序证明前病毒DNA含有6个组氨酸,从而在体外获得了感染性克隆病毒株。本研究通过SOE法巧妙地对S2基因引入突变,插入HIS标签,成功地获得了标记感染性分子克隆,证明S2基因缺失突变株在体外巨嗜细胞上培养不影响其复制力,为野毒株和疫苗毒的鉴别诊断打下基础。
其他文献
本试验将360尾体重40g左右的鲤鱼,随机分为9组,采用U(8)拟水平二次均匀试验设计研究了溢多酶(898-A)和溢康素-Ⅱ对鲤鱼生长性能的最适添加水平。结果表明:溢多酶(898-A)和溢
本试验选用了35日龄断奶的、平均体重为7.6kg的约克×长白二元杂交仔猪120头,研究了两种纯乳香型香味剂在饲粮中不同添加剂量,即0(A组)、300g/t(B组)、400g/t(C组)、300g/t(D
编撰现代胶体化学和高分子化合物化学教程的困难,是由这些科学的迅速发展而引起的,这种迅速发展,在我国进行的特别剧烈。这门科学的发展首先表现在它所包括的理论和实验资料
本文总结了我所近年来对14日龄早期断奶仔猪在消化器官及其内容物重、血清生化指标、内分泌、免疫功能、体内电解质平衡、胃肠道内容物pH与微生物区系、消化酶活性、小肠黏膜
本文对媒介研究机构基于SLA的Web服务质量控制进行了研究。文章对原有web服务描述语言WSDL进行扩展,加入了服务级协议的描述,形成了一种新的基于服务级协议的web服务描述语言
从国外邮购种子时,外国友人赠送了5粒种子,颗粒极小,似剪碎的头发末,焦黄色。种子袋上只写了拉丁文,是风铃玉属的种子,没有别的说明。2001年3月28日播种,得苗4株。其苗极小,
本文对喷雾干燥血浆蛋白和乳清浓缩蛋白进行了比较研究。结果表明，喷雾干燥血浆蛋白和乳清浓缩蛋白都是乳猪饲料的最佳原料。但是由于两者在来源、性质和主要成分上的差异,相
本试验研究目的观察生长抑素主动免疫对生长湖羊生长激素脉冲分泌及生长激素基因表达的影响,以期部分地了解其促生长作用机理,结果显示主动免疫并不能改变激素脉冲分泌模式,
经过三次饲养试验和两次屠宰试验对中草药饲料添加剂的多功能进行了较全面、系统的研究。结果表明:筛选出的中草药饲料添加剂醇水制剂优于其他制剂,用药量少,效果显著;能提高
用24头荣昌经产母猪,分4个梯度(风干青贮甘薯占日粮0％、20％、40％和60％)进行了一个产仔期的青贮甘薯饲养试验,结果表明:青贮甘薯提高了母猪妊娠110天增重,但同时也提高了母猪妊娠1