【摘 要】
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目的：探讨靶向小鼠髓样细胞触发受体l(triggering receptor expressed on myeloid cells-1,TREM-1)的小分子干扰RNA (small interfering RNA,siRNA)在体外对内毒素刺激小鼠巨
【机 构】
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广东医学院附属医院药学部,广东 湛江 524001
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目的：探讨靶向小鼠髓样细胞触发受体l(triggering receptor expressed on myeloid cells-1,TREM-1)的小分子干扰RNA (small interfering RNA,siRNA)在体外对内毒素刺激小鼠巨噬细胞株RAW264.7分泌肿瘤坏死因子α (tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素1β (interleukin 1β,IL-1β)的抑制作用.
方法：合成1条靶向小鼠TREM-1分子的siRNA序列,以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)作为报告因子,荧光显微镜和流式细胞仪下观察EGFP的荧光强度,验证siRNA序列的干扰率.以pLKO1.1为载体构建针对TREM-1的pLKO1.1-TREM1-shRNA干扰质粒.将小鼠巨噬细胞株RAW264.7分为4组:空白组(Control);内毒素组(LPS组);空质粒组(pLKO1.1组):采用脂质体法将pLKO 1.1转染细胞;干扰组(siRNA组):将pLKO 1.1-TREM1-shRNA转染细胞;转染72h后用内毒素刺激24h,并以实时定量PCR分别检测TREM-1、TNF-α与IL-1β的表达;以ELISA分别检测上清液中TNF-α.、IL-1β含量.
结果：与LPS组比较,siRNA组中TREM-1、TNF-α、IL-1β的mRNA显著下降(P＜0.05),上清液中TNF-α、IL-1β 含量明显降低(P＜0.05).
结论：小分子干扰RNA可能通过抑制TREM-1基因的表达而减少内毒素诱导小鼠巨噬细胞264.7中TNF-α、IL-1β 的分泌.
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