【摘 要】
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目的：原核表达人骨唾液酸蛋白蛋白,建立胶体金免疫层析检测方法.方法：构建pET15b-BSP原核表达载体,转化至大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中进行诱导表达.筛选BSP抗体,建立胶体金免疫层析检测方法检测人骨唾液酸蛋白,并对检测方法进行方法学评价.结果：成功构建E.coli BL21(DE3)-pET15b-BSP原核表达菌,经过表达条件优化,重组人BSP主要以可溶性蛋白形式存在,经过纯
【机 构】
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长春理工大学生命科学技术学院 吉林长春迪瑞医疗科技股份有限公司
【出 处】
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中国医学装备协会第26届学术与技术交流年会
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目的：原核表达人骨唾液酸蛋白蛋白,建立胶体金免疫层析检测方法.
方法：构建pET15b-BSP原核表达载体,转化至大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中进行诱导表达.筛选BSP抗体,建立胶体金免疫层析检测方法检测人骨唾液酸蛋白,并对检测方法进行方法学评价.
结果：成功构建E.coli BL21(DE3)-pET15b-BSP原核表达菌,经过表达条件优化,重组人BSP主要以可溶性蛋白形式存在,经过纯化、浓缩得到纯度为96.3％、浓度为7.44mg/ml的BSP蛋白,经过SDS-PAGE分析重组BSP分子量约为37kDa.利用重组BSP及多对抗体,建立ELISA方法筛选具有良好特异性、不同表位的高效抗体对,建立胶体金定性检测方法,有效检测范围100ng/ml-300ng/ml,4℃可保存10个月.利用试纸条验证重组BSP抗原性.
结论：通过研究得到了具有良好抗原性的重组人BSP,初步建立了BSP胶体金免疫层析快速半定量检测方法,为临床快速检测血清BSP提供了理论基础和技术保障.
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