目的观察TNF-α对SD大鼠骨髓间充质干细胞(rBMSCs)成骨分化的影响,并从DNA甲基化水平探讨其机制。方法采用不同浓度TNF-α(浓度A,B,C,D pg/ml)干预rBMSCs,于第7天和第14天分别进行碱性磷酸酶(ALP)染色和茜素红染色,观察不同浓度TNF-α对rBMSCs成骨分化的影响;干预第5天后提取RNA和蛋白,进行RT-PCR和Western blot,验证Runx2、ALP、OPN等成骨相关基因和蛋白表达的变化,最后观察TNF-α对rBMSCs Runx2基因甲基化水平的影响,从DNA甲基化水平探讨其对rBMSCs成骨分化影响的作用机制。结果 ALP染色和茜素红染色结果显示浓度A pg/ml和浓度B pg/ml TNF-α可以明显抑制rBMSCs成骨分化,其中浓度A pg/ml的抑制作用最明显。RT-PCR和westem blot结果显示,浓度A pg/ml和浓度B pg/ml两个浓度TNF-α干预rBMSCs后,Runx2、ALP、OPN等成骨相关基因表达较对照组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。Runx2基因位点甲基化结果显示,TNF-α干预rBMSCs后,Runx2基因甲基化水平明显增高。结论 TNF-α可以通过增高Runx2基因位点甲基化水平,降低Runx2基因的表达,从而抑制rBMSCs的成骨分化。