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目的：体外培养骨骼肌L6细胞,采用棕榈酸(PA)诱导的方法,建立骨骼肌L6细胞胰岛素抵抗(IR)模型.给予不同条件的人工干预,应用Western blot方法,测定骨骼肌源性脂联素(APN)、p38MA：PK和GLuT4的蛋白表达水平。探讨在脂联素影响骨骼肌IR模型GLT4的表达中,p38MAPK信号通路的地位和作用。
方法：⑴体外培养大鼠L6成肌细胞并诱导分化为成熟骨骼肌L6细胞,给予不同浓度(0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mmol/l)的PA,并应用葡萄糖氧化酶法分别测定不同时间(2、4、8、12、24、36h)细胞培养上清液葡萄糖浓度,观察不同浓度PA对L6细胞摄取葡萄糖的影响,据此判断IR模型建立成功与否；⑵根据干预条件的不同,实验分为四组：NC组(对照组,骨骼肌L6细胞组)；：NC+sB组(对照+阻滞剂SB203580组)；IR组(胰岛素抵抗模型组)；IR4+PIO组(IR模型+吡格列酮组)。应用Western blot方法分别测定上述四组APN、p-p38MAPK和GULT4蛋白表达水平。
结果：①0.4mmol/L的PA在作用12、24、36h以及0.6-0.8mm01]I.PA作用8、12、24、36h后,细胞培养上清液中葡萄糖含量,明显高于对照组(P<0.05).据此判断IR模型建立；②通过Westernblot方法分别测定上述四组中APN、p-p38MAPK和GULT4蛋白表达水平。结果显示：与NC组比较,IR组APN和GULT4蛋白表达均减少,差异有统计学意义(P<0.05),而p-p38MAPK虽减少,但无统计学意义(P>0.05)；与NC组比较,NC+SB组p-p38MAPK和GULT4的蛋白表达均减少(P<0.05),差异有统计学意义,尽管APN蛋白表达水平减少,但无统计学意义(P>0.05)；与IR组比较,IR+PIO组其APN、p-p38MAPK和GULT4蛋白表达均增加,差异有统计学意义(P<0.05)。
结论：⑴大鼠L6细胞株通过培养并分化成熟后,经过一定浓度和时间的棕榈酸诱导,可以建立大鼠L6细胞胰岛素抵抗模型；⑵大鼠L6细胞可以分泌和表达脂联素,并影响L6细胞GIMT4-蛋白的表达；⑶骨骼肌源脂联素上调L6细胞GLUT4.的表达,p38MAPK信号通路可能是其重要的信号途径之一；⑷吡格列酮可增加L6细胞脂联素的分泌,其改善胰岛素敏感性可能和激活p38M.APK信号通路有关。
方法：⑴体外培养大鼠L6成肌细胞并诱导分化为成熟骨骼肌L6细胞,给予不同浓度(0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mmol/l)的PA,并应用葡萄糖氧化酶法分别测定不同时间(2、4、8、12、24、36h)细胞培养上清液葡萄糖浓度,观察不同浓度PA对L6细胞摄取葡萄糖的影响,据此判断IR模型建立成功与否；⑵根据干预条件的不同,实验分为四组：NC组(对照组,骨骼肌L6细胞组)；：NC+sB组(对照+阻滞剂SB203580组)；IR组(胰岛素抵抗模型组)；IR4+PIO组(IR模型+吡格列酮组)。应用Western blot方法分别测定上述四组APN、p-p38MAPK和GULT4蛋白表达水平。
结果：①0.4mmol/L的PA在作用12、24、36h以及0.6-0.8mm01]I.PA作用8、12、24、36h后,细胞培养上清液中葡萄糖含量,明显高于对照组(P<0.05).据此判断IR模型建立；②通过Westernblot方法分别测定上述四组中APN、p-p38MAPK和GULT4蛋白表达水平。结果显示：与NC组比较,IR组APN和GULT4蛋白表达均减少,差异有统计学意义(P<0.05),而p-p38MAPK虽减少,但无统计学意义(P>0.05)；与NC组比较,NC+SB组p-p38MAPK和GULT4的蛋白表达均减少(P<0.05),差异有统计学意义,尽管APN蛋白表达水平减少,但无统计学意义(P>0.05)；与IR组比较,IR+PIO组其APN、p-p38MAPK和GULT4蛋白表达均增加,差异有统计学意义(P<0.05)。
结论：⑴大鼠L6细胞株通过培养并分化成熟后,经过一定浓度和时间的棕榈酸诱导,可以建立大鼠L6细胞胰岛素抵抗模型；⑵大鼠L6细胞可以分泌和表达脂联素,并影响L6细胞GIMT4-蛋白的表达；⑶骨骼肌源脂联素上调L6细胞GLUT4.的表达,p38MAPK信号通路可能是其重要的信号途径之一；⑷吡格列酮可增加L6细胞脂联素的分泌,其改善胰岛素敏感性可能和激活p38M.APK信号通路有关。