泥蚶金属蛋白酶组织抑制因子基因克隆与表达分析

来源 :2013年全国海水养殖学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:casterisme
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本实验通过RACE方法克隆得到泥蚶三种金属组织蛋白酶抑制因子,分别命名为Tg-TIMP-2-like、Tg-TIMP-3-like和Tg-TIMP-4-like,全长分别为869bp、804bp和1164bp;分别编码236、189、222个氨基酸;推导分子量为26.94kDa、20.73kDa和22.67kDa;理论等电点分别为8.38、8.67和8.00。Signa1P3.0分析表明Tg-TIMP-3-like拥有一个含16个氨基酸的信号肽,Tg-TIMP-4-like拥有一个含23个氨基酸的信号肽,这个信号肽在高度保守的Cys-X-Cys(泥蚶中X为Tyr)上游切除。Tg-TIMPs-like与其他贝类的TIMP氨基酸序列比对显示相似性在24.4%-45.6%。利用Mega5.05构建进化树发现TIMP蛋白聚为2大分支,即脊椎动物和无脊椎动物,脊椎动物TIMP分支又包括四个分支(TIMP-1,2,3,4),因此推断脊椎动物的TIMP可能是依据其结构进行分类,而无脊椎动物TIMP研究较少,分类不明显,目前未发现无脊椎动物含有类似TIMP-1基因。荧光定量qRT-PCR检测显示Tg-TIMPs-like基因在血液、肝胰腺、闭壳肌、斧足、外套膜和鳃组织中均有表达,且不同的TIMP基因的组织分布有所不同。发现Tg-TIMP2-like基因在外套膜中表达最大,鳃中次之;Tg-TIMP3-like基因在鳃中表达最大,外套膜中次之;Tg-TIMP4-like基因在血液中表达最大,鳃中次之。血细胞是免疫反应的主要细胞成分。鳃是贝类的呼吸器官,对水中的细菌和有毒物质起到过滤的作用,是免疫防御的第一道屏障。而外套膜也是与外界接触最直接的,也是作为抵御外界细菌和有毒物质的第一道防线。根据三种TIMP基因在组织中的表达量,推测其可能在免疫防御中会起重要的作用。
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