【摘 要】
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球等鞭金藻是一种富含多种多不饱和脂肪酸的海洋微生物,是生产二十二碳六烯酸(DHA)的重要资源.在藻类微生物中,△4-脂肪酸脱氢酶是合成DHA的关键酶之一,也是由二十碳五烯
【机 构】
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南开大学微生物学系 分子微生物学与技术教育部重点实验室,天津 300071
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球等鞭金藻是一种富含多种多不饱和脂肪酸的海洋微生物,是生产二十二碳六烯酸(DHA)的重要资源.在藻类微生物中,△4-脂肪酸脱氢酶是合成DHA的关键酶之一,也是由二十碳五烯酸(EPA)生成二十二碳六烯酸的限速酶.本文根据已经报道的△4-脂肪酸脱氢酶基因设计引物,分别从球等鞭金藻H29基因组DNA和eDNA中扩增得到该基因片段,序列分析表明：结构基因全长1302bp,编码433个氨基酸；该基因没有内含子,与已经报道的从球等鞭金藻中克隆得到的△4-脂肪酸脱氢酶氨基酸序列大小相同,但是在N端序列存在较大差异.利用酿酒酵母的表达载体pYES2.0,构建△4-脂肪酸脱氢酶的表达载体pYES2-FAD4-2,并转化到营养缺陷型酿酒酵母菌株INVScl中,在选择培养基中筛选得到酿酒酵母转化菌株YFAD4-2.YFAD4-2在合适的培养和诱导条件下,添加外源底物二十二碳五烯酸(DPA)并诱导基因表达.脂肪酸甲酯气相色谱分析表明该球等鞭金藻△4-脂肪酸脱氢酶基因在酿酒酵母中获得了高效表达,可以将二十二碳五烯酸转化成二十二碳六烯酸,其底物的转化率达到了34.2％,转化率明显高于已经报道的其它△4-脂肪酸脱氢酶,这为生产二十二碳六烯酸提供了又一个有利条件.
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