转细胞凋亡抑制基因p35和iap玉米抗纹枯病的研究

来源 :中国植物病理学会2011年学术年会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lpucicy
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玉米纹枯病是一种分布范围广泛的世界性病害。其病原菌立枯丝核菌具有强腐生性和宽寄主范围,至今未发现对纹枯病菌高抗的玉米品种。本研究利用连接多肽LP4/2A把细胞凋亡抑制基因iap和p35进行连接,构建了融合基因表达载体。这种策略既可以实现两个基因的融合,又可以通过剪切形成两个独立的蛋白分别行使功能。利用农杆菌介导法将构建的植物表达载体转入玉米中,以获得稳定遗传的再生植株。在本研究中,采用高保真PCR技术,分别从质粒pCAMBIA1305.1-p35和pBI121-iap中扩增出p35和iap基因,然后通过重叠延伸PCR法融合两个基因,两基因间通过LP4/2A连接多肽连接。为了提高基因的表达效率,选择了具有较强表达活性的启动子玉米泛素启动子UBI-1和来源于烟草花叶病毒(TMV)富含TTAAC序列的非翻译前导序列Q序列作为增强表达元件,并在融合基因前加了kozak序列以增强基因的表达。再通过PCR技术将NOS终止子扩增出来,最终依次将NOS终止子、UBI-Ω融合片段和p35-iap融合基因插入植物表达载体pCAMBIA3301,筛选、鉴定重组质粒pCUTN。本研究通过农杆菌介导法将重组质粒pCUIN转入玉米中,PCR鉴定转基因植株,并通过RT-PCR检测外源融合基因在玉米体内是否正确转录,融合基因在转录水平上是否完整,Westem-blot检测p35和iap两基因的蛋白在植物体内是否正确表达。
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