【摘 要】
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目的：克隆PP2Acα异构体(PP2Acα2)并分析该基因结构,构建PP2Acα2和PP2Acα载体并建立高表达细胞株.方法：诱导HL-60细胞表达PP2Acα2,克隆PP2Acα2和PP2Acα使用pCMV-Tag4A真核表达载体构建重组质粒.通过转染建立高表达细胞株,RT-PCR和蛋白免疫印迹实验检测其PP2Acα2和PP2Acα基因和蛋白水平,使用细胞计数法检测细胞株生长曲线和流式细胞仪检测
【机 构】
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广西医科大学公共卫生学院,广西南宁530021 广西医科大学基础医学院
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目的：克隆PP2Acα异构体(PP2Acα2)并分析该基因结构,构建PP2Acα2和PP2Acα载体并建立高表达细胞株.方法：诱导HL-60细胞表达PP2Acα2,克隆PP2Acα2和PP2Acα使用pCMV-Tag4A真核表达载体构建重组质粒.通过转染建立高表达细胞株,RT-PCR和蛋白免疫印迹实验检测其PP2Acα2和PP2Acα基因和蛋白水平,使用细胞计数法检测细胞株生长曲线和流式细胞仪检测细胞周期.蛋白免疫印迹实验检测免疫球蛋白结合蛋白1(IGBP1)在构建成功的细胞中的改变.结果：经过测序鉴定PP2Acα2和PP2Acα重组质粒构建成功,PP2Acα2为PP2Acα剪切异构体缺失第五外显子.RT-PCR和蛋白免疫印迹结果显示成功构建表达PP2Acα和PP2Acα2的HEK293细胞株.转染后的细胞生长曲线和细胞周期未发生明显改变.IGBP1在转染了PP2Acα2的HEK293细胞株中表达量分别是Vetor组和PP2Acα组的2.2倍和1.5倍.结论：成功克隆了PP2Acα2基因并构建了重组质粒,成功构建了高表达PP2Acα2细胞株.为阐明PP2Acα2的作用机制及其生物学效应提供了可靠的平台.
其他文献
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目的：探讨不同质量浓度的大气颗粒物PM2.5对人支气管上皮细胞(HBE)毒性和氧化应激的作用.方法：用不同质量浓度(0、2.5、5、10、25、50、100、250、500、100 μ g/ml)的PM2.5处理HBE细胞,分别用CCK-8检测细胞增殖情况和用2,7-二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)探针检测细胞内活性氧(ROS)的水平；并用活性氧抑制剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)预处理HBE细胞
目的：探讨游离二氧化硅诱导大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(RLE-6TN)发生上皮间质转分化的细胞表面标志物蛋白表达情况.方法：提取SPF级SD大鼠原代巨噬细胞,并常规培养巨噬细胞和RLE-6TN.CCK-8细胞活性实验确定SiO2的染尘浓度,以游离二氧化硅为受试物观察RLE-6TN发生上皮间质转分化的情况.实验分为4组：直接对照组、直接染尘组、间接对照组和间接染尘组,在游离二氧化硅染尘0h、24h、48h
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目的：自噬功能紊乱被认为是纳米材料的重要毒性机制,纳米二氧化硅可引起自噬体的累积,但具体机制不清。本研究目的为明确纳米二氧化硅对肝细胞自噬功能的影响并探讨其潜在分子机制。方法：本研究以人正常肝细胞L-02和人肝癌细胞HepG2为模型,在透射电镜下观察纳米二氧化硅的细胞摄取,利用CCK8试剂盒检测纳米二氧化硅的细胞毒性；Western blot、细胞免疫荧光法联合应用激光共聚焦显微镜和透射电镜技术检
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