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目的 心肌细胞，采用荧光漂白后恢复技术(FRAP)检测缝隙连接蛋白的表达水平以评价心肌细胞间缝隙连接通讯功能(GJIC).方法 鉴定新生小鼠心肌细胞并分离培养，经抗a-肌动蛋白免疫荧光标记心肌组织细胞，应用激光共聚焦显微镜断层扫描并制作三维图像.另取小鼠心脏分别用机械剪切和胰蛋白酶消化法处理，应用6-CFDA荧光探针标记，测定GJIC功能，实时记录动态荧光恢复曲线.结果 小鼠心肌组织经抗a-肌动蛋白I抗体免疫荧光染色后双光子激光共聚焦显微镜下观察可见心肌细胞呈阳性反应，肌纤维清晰可见；接种1周后细胞贴壁生长并伸出伪足，细胞形状多样化，胞浆内颗粒丰富，细胞胞体逐渐增大，细胞之间借枝状突起相连接.断层扫描及三维结构重建后可见心肌细胞间有明显的隔膜缝隙，闰盘结构胞膜凹凸相嵌.FRAP结果显示机械处理心肌组织分离的心肌细胞保持较强的活性，消化酶处理的心肌组织细胞活性降低；通过荧光淬灭恢复曲线可观察到酶消化处理的心肌细胞荧光淬灭恢复能力低于机械剪切处理的心肌细胞.结论 应用双光子激光共聚焦显微镜可清晰观察到心肌细胞特异性横纹结构；三维成像测量细胞大小及细胞结构，并通过荧光动态恢复曲线可证明心肌细胞间存在缝隙连接通讯功能，其强弱与心肌细胞活性密切相关.