蛋白激酶(protein kinases)又称蛋白质磷酸化酶,它通过催化转移ATP末端的磷酸基团到蛋白质的特定氨基酸残基上,使蛋白质发生磷酸化反应,从而改变蛋白质的构象和活性.蛋白激酶A(PKA)作为蛋白激酶家族成员中重要一员,是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,在新陈代谢、细胞信号通讯、细胞分化与增殖等生命活动中起着重要作用.异常表达的PKA活性与多种疾病有关,如糖尿病、癌症和肥厚型心肌病等疾病.因此,PKA活性及其抑制剂的检测对疾病的诊断、治疗和药物的研发具有非常重要的指导意义. 电化学发光是化学发光与电化学相结合的产物。它具有灵敏度高、线性范围宽、分析速度快、仪器设备简单、操作方便等特点。电化学发光电化学法作为一种有效的分析检测方法，自问世以来就受到广泛的重视，并逐渐在蛋白激酶活性分析领域引起了许多的兴趣。然而目前运用电化学发光方法用于蛋白激酶的检测主要是利用一些发光化学试剂。由于发光化学试剂存在试剂消耗量高，环境污染和修饰复杂等一些问题，使其应用受到限制。因此，非常有必要结合发光纳米材料，运用电化学发光技术用于蛋白激酶的检测。本文利用CT四聚体DNA酶和金颗粒都能够猝灭石墨烯量子点电化学发光特性，发展了一种高灵敏电化学发光用于PKA活性及其抑制剂的检测方法。首先通过共价交联的方式将底物肽自组装于修饰有石墨烯量子点的氧化锢锡(ITo)电极表面。当在共反应剂H2O2存在的情况下，修饰有底物肤和石墨烯量子点的ITO电极可以检测到稳定且强度高的电化学发光信号。随后，将电极浸入到含有PKA的反应缓冲液中，使修饰在电极表面的底物肤发生磷酸化。当加入修饰有磷酸化DNA和G四聚体DNA酶的金颗粒(pDNA@DNAzyme-AuNPs)后，通过Zr4+能介导两个磷酸基团共价结合作用，pDNA@DNAzyme-AuNPs与磷酸化底物肤结合，进而靠近电极表面。此时，负载于金颗粒表面的DNAzyme能够催化消耗H2O2反应，使电化学发光信号减低。同时，由于金颗粒与石墨烯量子点之间的电化学发光能量共振转移作用，电化学发光信号进一步被碎灭。因此，结合DNA酶的催化反应和电化学发光能量共振转移的共同影响，电化学发光信号得到了很大的降低，从而实现了对PKA活性高灵敏地检测。实验结果表明，该方法对PKA活性分析的线性范围为0.05-5μmL-1，检测限为0.04μmL-1。基于此方法还进一步对其抑制实验、干扰实验及复杂样中的实际检测进行了考察。表明该方法在药物筛选以及临床研究中具有潜在的应用价值。