【摘 要】
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由驼孢锈菌(H.vastatrix)引起的咖啡叶锈病是小粒种咖啡生长过程中一种毁灭性病害。利用现代分子检测技术对该病原菌进行监测有助于咖啡锈病的预测预报。本研究利用真菌基因
【机 构】
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中国热带农业科学院环境与植物保护研究所农业农村部热带作物有害生物综合治理重点实验室海南省热带农业有害生物监测与控制重点实验室;
【基金项目】
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国家重点研发项目“特色经济作物化肥农药减施技术集成研究与示范”(2018YFD0201100);中国热带农业科学院基本科研业务费专项资金(1630042017021;1630042019030);农业部国际交流与合作项目“热带农业对外合作试验站建设和农业走出去企业外籍管理人员培训(SYZ2019-08);FAO/IAEA合作研究项目(No.20380)
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由驼孢锈菌(H.vastatrix)引起的咖啡叶锈病是小粒种咖啡生长过程中一种毁灭性病害。利用现代分子检测技术对该病原菌进行监测有助于咖啡锈病的预测预报。本研究利用真菌基因组内源转录间隔区通用引物ITS1/ITS4为第一轮扩增引物,以咖啡锈菌特异性引物Hv-ITS-F (GGTACACCTGTTTGAGAGTATG),Hv-ITS-R (CAAAATATGTCATACCTCTC ATTCT)为第二轮扩增引物,以建立咖啡锈菌巢式PCR检测技术。试验结果表明,利用上述引物对,前后两轮扩增退火温度分别为55℃与58℃时,该检测技术仅能从含有咖啡锈菌NDA组中扩增出约346bp的特异条带,而从其他真菌DNA中均扩增不出任何条带。其检测灵敏度在DNA水平上可达10～(-4)ng/μL,较常规PCR提高100倍。利用该检测技术对91个大田疑似样品进行检测,其检出率为95.6%。总之,本研究所建立的咖啡锈菌巢式PCR检测方法对病原菌的早期快速检测、鉴定及病害流行学研究具有重要意义。
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