胰腺是一个较为特殊的器官,现有分离方法不能理想地分散胰腺组织获得大量胰腺单细胞,从而阻碍了利用流式细胞术对胰腺细胞进行分析和分选。本研究利用胶原酶和胰酶在不同条件下分离小鼠胰腺组织,摸索建立了利用胰蛋白酶冷消化分离制备胰腺单细胞悬液的最佳方法。与胶原酶37℃温消化以及胶原酶胰蛋白酶联合温消化法比较,胰酶冷消化法分离得到细胞悬液单细胞比率达到95%以上,远远高于胶原酶消化的60%～70%以及联合消化法的86%～89%;胰酶冷消化14～18小时,平均每克组织得到2.53～2.63x10~7细胞,较胶原酶消化(1.21x10~7)及联合温消化(2.14x10~7)的细胞得率显著提高;胰蛋白酶冷消化法分离细胞活性为87.82%～89.34%,远高于胶原酶温消化(65.66%)以及联合消化法(49.66%);将冷消化分离得到的胰腺单细胞进行流式细胞分析,通过Brdu、DBA、Bcrpl等分子标记的检测发现,冷消化获得细胞比例与活体情况相似,而且实验重复结果稳定;在离体培养研究中发现,冷消化分离得到的这群细胞中能够筛选得到具有较强增殖能力的细胞集落。上述结果表明,胰蛋白酶冷消化法是一种适用于小鼠成体胰腺组织的分离方法,通过这种方法能够高效制备小鼠胰腺单细胞悬液,为利用流式细胞术进行胰腺细胞的分离和分析研究奠定了基础。