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【目的】猪圆环病毒(porcine circovirus,PCV)病是严重危害养猪业的重要传染病。国内外学者在诊断和检测技术方面开展了大量的研究。Envi sion免疫组化法是近年在国内外推广使用的一种免疫组化诊断新技术,与传统的ABC、SABC、LSAB和SP等方法相比较,具有高敏感、低背景、快速简便的特点。试验首次采用免疫组化Envision法对病猪肺组织中PCV2抗原进行定性、定位和半定量检测分析,初步建立了一种特异、简便、快速PCV2抗原的免疫组化检测体系,旨在为该病的早期诊断、临床鉴别和流行病学调查提供新的检测方法。【方法】以原核表达质粒PEGX-ORF2转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,表达了重组猪圆环病毒Ⅱ型ORF2(PCV-ORF2)融合蛋白包涵体,对包涵体进行复性、透析得到PCV-OR重组融合蛋白,并作为抗原免疫家兔,制备兔抗PCV-ORF2血清。ELISA检测抗血清效价,Protein G HP纯化血清,Western-blotting检测其特异性。采用免疫组化Envision法对PCV2病猪肺组织的病毒抗原进行定位检测,并初步构建PCV2抗原半定量检测的方法。【结果】1.兔抗PCV-ORF2血清效价为1:10240;获得纯度高、特异性好的兔抗PCV2IgG;确定PCV2IgG用于免疫组化Envision法染色的最佳工作浓度为1:3000。2.Envi sion法原位检测病猪肺组织PCV2抗原的分布,发现PCV2抗原的阳性表达主要在肺巨噬细胞胞浆内,其次为肺泡上皮细胞和细支气管粘膜上皮细胞。3.构建了免疫组化Envision法对PCV2抗原半定量检测的方法,依据阳性细胞百分率,进行染也结果判定:无阳性细胞着色或阳性细胞数<10%为阴性(一);阳性细胞数10%～25%为弱阳性(+);阳性细胞数25%～50%为阳性(++);阳性细胞数>50%为强阳性(+++)。对30例疑似PCV病猪进行检测,检出阳性病猪16例,阳性检出率为53.37%。【结论】免疫组化Envision法具有高敏感、低背景、快速简便的特点,可在动物传染性疾病诊断中推广应用。