【摘 要】
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采用RT-PCR和RACE的方法从杜氏盐藻中克隆出1 种淀粉磷酸化酶基因(GenBank accession No.KF061044)命名为DsSP,并对其进行了系统的生物信息学分析.结果表明：盐藻DsSP 基因的cDNA 全长为3 560 bp,编码1 031 个氨基酸；该蛋白为亲水性蛋白,无信号肽,无跨膜区域,为非跨膜蛋白,且定位于叶绿体；二级结构含有α-螺旋、β-折叠和无规卷曲；在870～8
【机 构】
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大连海洋大学 农业部北方海水增养殖重点实验室 大连 116023
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采用RT-PCR和RACE的方法从杜氏盐藻中克隆出1 种淀粉磷酸化酶基因(GenBank accession No.KF061044)命名为DsSP,并对其进行了系统的生物信息学分析.结果表明：盐藻DsSP 基因的cDNA 全长为3 560 bp,编码1 031 个氨基酸；该蛋白为亲水性蛋白,无信号肽,无跨膜区域,为非跨膜蛋白,且定位于叶绿体；二级结构含有α-螺旋、β-折叠和无规卷曲；在870～882 处有1 个磷酸吡哆醛结合位点；具有丝氨酸磷酸化位点,苏氨酸磷酸化位点和酪氨酸磷酸化位点；三维建模清晰显示,功能位点只包括α-螺旋和无规卷曲；进化分析表明：其与衣藻、团藻亲缘关系最近.将DsSP 的开放阅读框克隆到载体pGS-21a 上,成功构建了原核表达载体pGS21a-DsSP,表达形式分析表明,融合蛋白在上清和包涵体中均存在,上清蛋白经纯化获得纯度较高的可溶性融合蛋白；Western 印迹显示,该融合蛋白能被抗GST 单克隆抗体特异性识别,表明融合蛋白在E.coli.BL21 中成功表达.这些研究成果为进一步阐明DsSP 的功能及作用机制奠定了理论基础.
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