石斑鱼两种溶菌酶基因的分子克隆与功能研究

来源 :“全球变化下的海洋与湖沼生态安全”学术交流会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:abc000123444
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  石斑鱼是我国南方沿海地区重要的海水养殖经济鱼类,但病害频发给养殖业造成巨大的经济损失.因此,研究石斑鱼自身免疫相关基因及其机制,提高其免疫力和抗病力,对石斑鱼的健康养殖十分重要.溶菌酶是一种能水解肽聚糖的碱性酶,它能催化细菌细胞壁中肽聚糖N-乙酰氨基葡萄糖和N-乙酰胞壁酸之间的β-1,4糖苷键的水解,破坏肽聚糖支架,在内部渗透压的作用下细胞胀裂开,引起细菌裂解;在机体先天免疫系统中参与多种免疫反应,并协同其他免疫因子共同防御外来病原的入侵.溶菌酶还能与带负电荷的病毒蛋白直接作用,与DNA、RNA和脱辅基蛋白形成复合物使病毒失活.本研究从石斑鱼脾组织中克隆获得两种类型的溶菌酶:C型(Ec-lysC)和G型(Ec-lysG)溶菌酶.经LPS、溶藻弧菌和石斑鱼虹彩病毒SGIV刺激石斑鱼后,对Ec-lysC和Ec-lysG在头肾中的表达量进行荧光定量PCR分析,结果显示表达量均具有不同程度的升高,说明其在细菌和病毒的感染中发挥了相对重要的作用.将重组蛋白C型溶菌酶(rEc-lysC)和G型溶菌酶(rEc-lysG)纯化后,检测其抗菌活性.结果表明,两种溶菌酶对溶壁微球菌、溶藻弧菌、金黄色葡萄球菌和海豚链球菌都有一定的抑制性,但作用效果有差异.扫描电镜结果显示,与对照组相比,rEc-lysC对溶壁微球菌的表面形态破坏作用强于rEc-lysG.为进一步研究两种类型溶菌酶在SGIV感染中的作用,筛选了过表达的稳定细胞系,检测Ec-lysC和Ec-lysG过表达情况下SGIV的感染情况.结果揭示,两种类型溶菌酶过表达均能抑制SGIV感染的细胞病变进程,降低了病毒主要衣壳蛋白MCP的表达,但C型溶菌酶的抗病毒效果较明显.以上研究结果表明石斑鱼溶菌酶在宿主抵御细菌和病毒感染的免疫反应中发挥了重要的作用,这不仅丰富了石斑鱼先天性免疫的内容,也为进一步探索石斑鱼免疫机制及疾病防治提供新的策略和理论依据.
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