共培养诱导脐带间充质干细胞分化为Leydig细胞的实验研究

来源 :中华医学会第十八次全国儿科学术会议 | 被引量 : 0次 | 上传用户:bg8nij
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目的:男性原发性性腺功能不良造成雄激素水平低下,临床上普遍采用外源性激素替代的方法进行治疗.本研究初步观察以共培养技术诱导人源脐带间充质干细胞向Leydig细胞分化的可能性,探讨该方法在治疗男性原发性性腺功能低下症方面的可行性。方法:采集正常足月剖宫产健康婴儿的脐带,用酶消化法分离获得人源脐带间充质干细胞,传代培养。另取8w周龄的雄性C57小鼠,游离切除皋丸组织,酶消化后以差速贴壁法提取Leydig细胞,培养纯化。将第5代人源脐带间充质干细胞和小鼠原代Leydig细胞置于Transwell培养体系中隔离共培养,上层为Leydig细胞,下层为间充质干细胞,细胞数量为1×104。培养液由含有10%FBS的DMEM/F12培养基、5×10-7μmol/L全反式维甲酸和2.45×10-2mmol/L 8澳环磷酸腺昔混合而成。每72h换液一次,每次换液添加上清液0.5mL/孔,每周更换新鲜分离的Leydig细胞。单独的第5代脐带间充质干细胞培养作为实验对照。培养2w后,以Real time PCR技术检测干细胞内P450scc, 3p-HSD, 17p-HSD, LH-R, ACTH-R及P450c21的mRNA转录情况。结果:细胞诱导2w后,Real time PCR检测显示被诱导的间充质干细胞的P450scc, 3p-HSD,17p-HSD, LH-R, ACTH-R及P450c21 mRNA呈阳性表达,而对照组为阴性。结论:通过体外隔离共培养,有可能将人源脐带间充质干细胞诱导分化为Leyd ig细胞。
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