【摘 要】
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本实验通过PCR技术扩增牛型布氏杆菌外膜蛋白基因D15,将D15全长克隆至表达载体pCold TF中,构建重组表达质粒pCold TF-D15,转化大肠杆菌BL21(DE3)后,在IPTG诱导下表达大小约为
【基金项目】
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国家“973”项目(2010CB530202);中央级科研院所公益性研究专项(2012JB05)
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本实验通过PCR技术扩增牛型布氏杆菌外膜蛋白基因D15,将D15全长克隆至表达载体pCold TF中,构建重组表达质粒pCold TF-D15,转化大肠杆菌BL21(DE3)后,在IPTG诱导下表达大小约为130Ku的融合蛋白His-D15。Western Blot检测结果表明,His-D15能与布氏杆菌阳性牛血清发生特异性反应,表明D15具有免疫原性。此外,对D15的亚定位结果表明,D15为膜蛋白;对His-D15的纤连蛋白结合活性及纤连蛋白溶酶原结合活性实验结果表明,His-D15具有纤连蛋白溶酶原结合活性,但不具有纤连蛋白结合活性。本研究通过对D15免疫原性及相关生物学活性的研究,为进一步研究D15在牛型布氏杆菌感染、诊断及亚单位疫苗的研制等方面的作用提供基础。
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