EPSP合成酶基因表达载体构建及其在茄子上的转化研究

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为了充分利用茄子品种资源,加快遗传资源的改良,通过构建茄子的愈伤诱导再生体系和遗传转化体系,并导入对除草剂具有耐受能力的EPSP合成酶基因而获得具抗除草剂能力的材料。将人工合成的EPSP合成酶基因GmEPSPS-1构建到双元表达载体CPB上,以Bar为标记基因,采用35S启动子,获得可供使用的植物高效表达重组质粒。利用农杆菌介导茄子子叶、下胚轴的转化,将表达载体导入到茄子本地品种‘三月茄’和单性结实品系D-7中,研究适宜的愈伤诱导再生体系和遗传转化体系。经统计分析:茄子最佳不定芽诱导培养基为MS+NAA 0.1 mg·L-1+6-BA 2.0 mg·L-1+ZT 1.0mg·L-1+3%蔗糖+0.7%琼脂,pH 5.8。最佳植株再生培养基为MS+ZT 0.5 mg·L-1+3%蔗糖+0.7%琼脂,pH 5.8。最佳生根培养基为l/2MS+NAA 0.l mg·L-1+3%蔗糖+0.7%琼脂,pH 5.8。由此套再生培养系统可以获得茄子子叶68.33%和下胚轴61.67%的不定芽分化率,保证有效的再生苗数。农杆菌的抑菌抗生素宜采用头孢霉素100 mg·L-1和万古霉素100 mg·L-1。通过对侵染时间和共培养时间的优化,茄子最佳转化效率的侵染时间为10min,共培养时间为3d。研究选用了两种除草剂进行筛选,草甘膦选用57 mg·L-1作为合适的筛选压,草丁膦则选用10 mg·L-1合适。按照前述建立的茄子高效再生体系和遗传转化体系,由‘三月茄’子叶分化形成的再生植株,经试纸条鉴定,获得转EPSP合成酶基因植株4株。对部分T1代植株的除草剂抗性进行鉴定,分别利用1‰的草甘膦、1‰草丁膦进行腋芽涂抹或喷施处理,获得T1代抗性植株6株。
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