【摘 要】
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从大连刺参体内克隆了一个新的内源性丝氨酸蛋白酶抑制剂基因serpin,研究了该基因及trypsin基因的组织分布和自溶时序表达变化,以阐明Trypsin及其内源性抑制剂serpin在海
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从大连刺参体内克隆了一个新的内源性丝氨酸蛋白酶抑制剂基因serpin,研究了该基因及trypsin基因的组织分布和自溶时序表达变化,以阐明Trypsin及其内源性抑制剂serpin在海参自溶过程中的互作关系.采用同源克隆及cDNA末端快速扩增技术获得serpin基因全长,并利用实时荧光定量法对上述两基因的表达进行定量分析.实验结果显示：(1) serpin cDNA序列全长846bp,包括5端非编码区61bp,3端非编码区381bp和开放阅读框402bp,整个开放阅读框编码133个氨基酸.(2) trypsin和serpin在刺参的管足、背部表皮、呼吸树、肠、纵行肌及体腔细胞中均有表达,在肠的表达量最高.(3)室温下自溶过程中,在背部表皮,trypsin和serpin表达水平在0h到3h均出现不同程度的下降,trypsin表达水平在5h出现最大值,是0h的1.9倍,之后表达水平下降且都低于0h； trypsin/serpin的比值在0h到24h显著增加,表明Trypsin表达量上调程度高于serpin.而在腹部管足,除了3h,trypsin/serpin的比值在其他时间点均较低.结果提示,自溶过程trypsin/serpin之间的平衡被打破.作为刺参可食部位,背部表皮和腹部管足,trypsin/serpin的消长规律不同,这很可能于刺参两个部位细胞对外界应激的不同应答方式有关.
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