【摘 要】
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Lgr5 (Leucine-rich repeat-containing G-protein coupled receptor 5)是人和鼠肠道上皮干细胞(Intestinal epithelial stem cell,IESC)的标志基因,它标记的细胞被称为
【机 构】
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华南农业大学动物科学学院,广州510642
【出 处】
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中国畜牧兽医学会动物营养分会第七届中国猪营养学术研讨会
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Lgr5 (Leucine-rich repeat-containing G-protein coupled receptor 5)是人和鼠肠道上皮干细胞(Intestinal epithelial stem cell,IESC)的标志基因,它标记的细胞被称为隐窝基底柱状细胞(Crypt base columnar cells,CBCs),是一类相对活跃的IESC.Lgr5蛋白是G蛋白偶联受体超家族成员,由具有18个富含亮氨酸的重复单位和7个跨膜区域组成的大分子蛋白.猪肠上皮干细胞的分选需要借助特异性表面标记,目前猪Lgr5基因的功能未知.本试验以3头长白猪十二指肠、空肠组织为试验样品,采用RT-PCR、cDNA末端快速扩增法(Rapid amplification of cDNA ends,RACE)和重叠PCR方法,克隆得到了猪Lgr5一段包含完整开放阅读框(Open Reading Frame,ORF)的序列,并运用生物信息学方法分析预测了Lgr5蛋白的结构与功能.结果表明,克隆得到的猪Lgr5cDNA片段长2832-bp,其中ORF长2724-bp,3非编码(Untranslated Region,UTR)长108-bp,GenBank登录号为KP717080.CDS (Coding sequence)翻译的氨基酸序列,与人的氨基酸序列比对的同源性为90.30％.生物信息学分析提示,Lgr5蛋白是膜蛋白,存在信号肽,具有7个跨膜区域,由907个氨基酸组成,相对分子量为99337.1,等电点是5.92.它的半衰期约为30小时,不稳定系数为46.48,表明Lgr5蛋白不稳定.它的平均疏水率0.269,表明Lgr5蛋白为弱疏水性蛋白.结果提示,我们首次成功克隆了猪肠道上皮干细胞marker基因Lgr5,这为揭示猪Lgr5基因的功能和猪肠道上皮发育奠定了基础.
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