【摘 要】
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原始生殖细胞(PGCs)起源于胚胎发育早期,是动物繁殖及繁殖工程的基础.在脊椎动物中,Dead end(dnd)基因是PGCs 的迁移、存活的必要因素.为了研究dnd 在达氏鲟(Acipenser dabryanus)中的表达模式和功能,我们利用同源克隆的方法从达氏鲟的性腺组织中分离鉴定出了dnd 的同源基因,即Addnd.达氏鲟dnd 基因cDNA 序列包括开放阅读框1191 bp,编码396
【机 构】
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农业部淡水生物多样性保护重点实验室,长江水产研究所,中国水产科学研究院,武汉,430223,中国;中国科学院水生生物研究所,武汉 430223
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原始生殖细胞(PGCs)起源于胚胎发育早期,是动物繁殖及繁殖工程的基础.在脊椎动物中,Dead end(dnd)基因是PGCs 的迁移、存活的必要因素.为了研究dnd 在达氏鲟(Acipenser dabryanus)中的表达模式和功能,我们利用同源克隆的方法从达氏鲟的性腺组织中分离鉴定出了dnd 的同源基因,即Addnd.达氏鲟dnd 基因cDNA 序列包括开放阅读框1191 bp,编码396 个氨基酸.通过氨基酸序列多重对比发现,AdDnd 与其他物种一样,具有包括RNA 识别域在内的6 个保守结构域.进化分析表明,达氏鲟Dnd 属于硬骨鱼类分支.半定量PCR 结果显示,Addnd mRNA 为母系遗传且仅在性腺组织中表达.利用RNA 定点表达技术(Localized RNA expression,LRE),将达氏鲟dnd 基因3′UTR 融合荧光表达蛋白,通过显微注射技术将GFP-Addnd 3′UTR mRNA 注射到达氏鲟早期胚胎中发现,Addnd 3′UTR 能有效地标记并追踪达氏鲟PGCs.此外,注射Addnd 的morpholino oligonucleotide(dnd-MO)消减Addnd 的表达则在胚胎发育时期检测不到PGCs 标记信号或信号减少变弱.本研究为获取不育的达氏鲟,使“借腹生子”技术在鲟鱼得以应用初步奠定了基础.
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