【摘 要】
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目的 建立体外皮肤刺激性替代试验的新方法小鼠皮肤功能完整性试验(SIFT),并初步评价该方法在皮肤刺激性评价中的应用价值.方法 制作离体皮肤固定装置,用正常大鼠皮片固定于装置后的TER值及TEWL值变化及病理组织学变化来评价其可行性.选用12种不同化学物初步建立SIFT试验,并选用36种化学物进行SIFT试验,采用SPSS(ver16.0)统计软件对实验结果进行统计分析,评价SIFT方法的重复性、
【机 构】
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广东省疾病预防控制中心,广东广州511430;中山大学公共卫生学院,广东广州510009 广东省疾
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目的 建立体外皮肤刺激性替代试验的新方法小鼠皮肤功能完整性试验(SIFT),并初步评价该方法在皮肤刺激性评价中的应用价值.方法 制作离体皮肤固定装置,用正常大鼠皮片固定于装置后的TER值及TEWL值变化及病理组织学变化来评价其可行性.选用12种不同化学物初步建立SIFT试验,并选用36种化学物进行SIFT试验,采用SPSS(ver16.0)统计软件对实验结果进行统计分析,评价SIFT方法的重复性、可靠性以及对化学物皮肤刺激性的预测能力.结果 1.SIFT试验方法的建立①离体皮肤固定装置对皮片稳定性作用的评价：表皮无破损的离体小鼠皮片置于固定装置中32 h内,电阻值(ER)和皮肤水分流失速率值(TEWL)保持相对稳定,TEWL与ER变化曲线重复性一致,满足SIFT试验的要求.②染毒体积的确定：分别以20,40,50,75,100,125,150,175,200,225和250 μl作为染毒剂量对12种不同受试化学物进行试验,将各染毒体积组的ER与TEWL变化率分别与阴性对照组的变化率做t检验,评价不同染毒体积对化学物刺激性的预测能力.结果显示染毒体积在150μL以上的各组化学物的刺激性预测有较高的敏感度和特异度,预测能力较好.因此,选择150 μl作为SIFT试验的染毒体积.③皮肤刺激性判断的界定值的确定：选取12种受试化学物进行SIFT试验,分析试验结果,比较不同的界定值对刺激性的预测能力,结果显示选择ER与TEWL变化率3.5作为判定皮肤刺激性的界定值的评价结果与刺激性数据库的一致性和预测能力要高于单独以TEWL或ER变化率作为指标.④SIFT试验染毒时间的确定：染毒时间为4,12和21 h的SIFT实验结果分别与化学物刺激性数据库进行Pearson x2检验、McNemarBowker检验和Kappa检验,并分别计算灵敏度、特异度、假阳性率、假阴性率和ROC线下面积,结果显示21 h为SIFT试验方法的最佳染毒时间.2.SIFT试验应用于化学物刺激性检测的结果分析①SIFT试验重复试验结果：36种受试化学物3次重复试验结果差异无统计学意义(x2=0.039,P=0.851).②SIFT试验与化学物刺激性结果一致性分析：36种化学物的SIFT试验结果与已知的数据库结果进行Pearson x2检验、McNemar-Bowker检验和Kappa检验.结果显示SIFT试验结果与已知的刺激性数据具有较高的一致性(Kappa =0.794,P=0.00),差异无统计学意义(McNemar-Bowker,P=0.185).③SIFT试验方法对化学物刺激性的预测能力分析：SIFT试验方法对刺激性化学物的预测灵敏度为90.0％,特异度为91.6％.ROC曲线下面积为0.850,P=0.112.结论 首次在我国建立了小鼠皮肤功能完整性试验方法,通过对化学物和化妆品成品的应用性研究,认为SIFT方法稳定,且有较好的皮肤刺激性预测能力.
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