外周和中央角膜内皮前体细胞分离与鉴定的初步研究

来源 :第十二届全国角膜及眼表疾病学术大会暨第四届全国角膜屈光手术大会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:cartman8148
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  目的:通过成球法分离、培养兔的外周和中央角膜内皮前体细胞,并对其生物学特性进行检测.方法:用7.75mm环钻钻取角膜内皮,将角膜内皮分为两部分(7.75mm和7.75-10mm),撕取角膜后弹力层,消化后将角膜内皮细胞吹打成单个细胞,以104cells/well的密度分别接种于超低贴附24孔培养板,利用干细胞或前体细胞在无血清培养基中可以成细胞球生长的特性,筛选兔的角膜内皮前体细胞,比较外周和中央角膜内皮前体细胞形成细胞球的能力.通过光镜、免疫荧光分别从形态学和蛋白水平检测角膜内皮细胞前体细胞的生物学特性.结果:在培养的第3天,可见细胞球的形成.随着培养时间的增加,细胞球开始增大,培养到第7天,中央角膜内皮前体细胞形成细胞球数为31.38±9.40,外周角膜内皮前体细胞形成细胞球数为212.50±22.52,两者比较具有显著的统计学差异(p<0.01).外周细胞球爬出的细胞融合后具有更好的类似六边形的形态.免疫荧光检测神经元特异性烯醇化酶NSE、S-100、Na+-K+-ATPase、Brdu及P63呈阳性表达.结论:利用成球法成功分离了兔的角膜内皮细胞前体细胞.角膜内皮细胞前体细胞主要分布在外周角膜.
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