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目的:从分子水平上探讨PI3K/Akt信号途径在TGF-β1诱导上皮性卵巢癌细胞发生上皮间质转化与侵袭过程中的作用.
方法:培养人卵巢癌细胞株SKOV-3、3AO,分为对照组、TGF-β1组、TGF-β1 +LY-294002组、LY294002组;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法观察TGF-β1对SKOV-3、3AO细胞生长的作用;采用侵袭小室(Transwell小室)体外侵袭实验观察TGF-β1对SKOV-3、3AO细胞侵袭能力的影响;采用蛋白质免疫印迹技术(Western blot)检测磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、Twist、E-cadherin和N-cadherin蛋白表达的变化.
结果:(1)TGF-β1刺激后,SKOV-3和3AO细胞发生形态学改变,细胞呈纺锤形,部分细胞伸出伪足,细胞排列较为紊乱,细胞间连接较疏松.
(2)TGF-β1对卵巢癌细胞株SKOV-3和3AO生长增殖无显著影响(P＞0.05).
(3)经TGF-β1处理的SKOV-3和3AO细胞穿过Transwell小室的细胞数明显多于对照组(P＜0.05),且随浓度的增加而增加;经LY294002单独作用及两者联合处理组的两种细胞穿过Transwell小室的细胞数均明显减少(P＜0.05).
(4)TGF-β1可促进SKOV-3和3AO细胞中p-Akt蛋白的表达,PI3K/Akt通路阻断剂LY294002可抑制TGF-β1引起的SKOV-3、3AO细胞中Akt磷酸化的上调.
(5)TGF-β1刺激SKOV-3和3AO细胞后,可使转录因子Twist蛋白表达明显上调,间质细胞标志物N-cadherin表达上调,而上皮细胞标志物E-cadherin表达下调(P＜0.05);PI3K/Akt通路阻断剂LY294002可逆转TGF-β1的作用(P＜0.05).
结论:TGF-β1可能通过PI3K/Akt信号途径诱导SKOV-3和3AO细胞发生上皮间质转化,增强卵巢癌细胞的侵袭能力;PI3K/Akt通路阻断剂LY294002可以逆转此过程,并降低卵巢癌细胞的侵袭能力.