Rapid and sensitive detection of mud crab Scylla serrata reovirus by a reverse transcription loop-me

来源 :中国水产学会鱼病学专业委员会2011年学术讨论会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhoubin506
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  This pathogen is widespread in east China and causes severe economic losses to the nations mud crab industry.Early detection of this pathogen is necessary for disease control and reduction of economic loss.
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制备抗鲤春病毒(SVCV)单克隆抗体(MAb),以纯化的SVCV,免疫Balb/C小鼠,采用单克隆抗体技术经细胞融合、筛选和有限稀释法克隆,获得了2株能稳定分泌抗SVCV单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为1C12和9C11.2株单克隆抗体均为IgG亚型;腹水间接ELISA效价为10-1~10-4之间;特异性实验结果表明,单克隆抗体9C11和1C12只与SVCV反应,与实验中的其他病毒株和鱼类细胞
建立Taqman探针荧光定量RT-PCR检测传染性胰脏坏死病病毒(IPNV)的方法.选取IPNV病毒的基因保守序列,利用Primer Express 2.0软件设计引物与探针.以梯度稀释的含有IPNV目的扩增片段的质粒作为标准品,探索定量RT-PCR反应条件.
建立一种快速准确检测鱼类流行性造血器官坏死病病毒(EHNV)的方法.根据EHNV主要囊膜蛋白(MCP)合成了引物EHNV-F/R,进行PCR特异性扩增.通过PCR扩增,EHNV-F/R在约580bp处扩增出特异性条带,可用于检测蛙病毒属病毒,检测底限达0.01个TCID50,灵敏度优于病毒分离方法;而其它8种鱼类病毒和空白对照无目的片段,表明该引物特异性良好.使用EHNV-F/R的PCR检测方法特
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KHV分离株经KF-1和EPC细胞系培养增殖,病毒经超速离心和蔗糖密度梯度离心纯化.病毒多肽经SDS—PAGE电泳和免疫印迹分析发现:KHV-KF病毒悬液离心沉淀物及其60%庶糖梯度带纯化物中均有位于31.0-42.7kDa区间的至少3条蛋白条带.同时,在KHV-EPC病毒悬液离心沉淀物也有位于31.0-42.7kDa区间的3条蛋白条带.其他制备物中未发现蛋白条带,这也可能跟蛋白浓度过低有关.经免
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虹彩病毒是近年来导致许多种鱼类感染严重的、全身性疾病的主要病原体。病毒的跨膜蛋白是细胞识别的重要抗原表位,其在疾病的免疫学研究上具有重要作用。本文克隆了辽宁株虹彩病毒跨膜蛋白ORF049L的基因序列,并对其编码蛋白的跨膜螺旋、二级结构及抗原位点等进行了预测分析。
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