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目的:探讨宫颈癌相关成纤维细胞的分离和鉴定。
方法:回顾性分析郑州大学第一附属医院妇科2015年1月-3月收治的患者6例。CAFs获取源为行广泛全子宫和双附件切除加盆腔淋巴结清扫术的宫颈鳞癌患者3例,所有患者术前均未接受放化疗。NFs获取源为多发子宫肌瘤行全子宫切除术患者3例。标本获取前均获得本人知情同意。在无菌条件下切取组织标本,置于含5%甲硝哇的PBS中,20min内移回实验室。
结果:1.细胞的分离与培养,成功分离培养CAFs和NFs细胞,当细胞培养至3-5代时,用倒置相差显微镜观察两种细胞形态。CAFs生长速度较快,大小、形状不一,边缘有突起,排列不规则,重叠生长,密度抑制和接触抑制消失。而NFs生长速度较慢,大小,形状基本一致,呈长梭形,细胞间界限清楚,边缘规则,排列觉有一定方向性,存在密度抑制和接触抑制。2.细胞生长曲线,在同样的培养条件下,种植细胞数目相同和观察时间相同,CAFs的增殖速度明显强于NFs.(P<0.05),3.TGFβ1的含量,通过ELISA方法测定细胞培养上清中TGF-β1的水平。发现CAFs中TGF-β1的浓度为449.93±14.92ng/L,而NFs中TGF-β1浓度为209.5 ±9.34ng/L。CAFs分泌TGF-β1的含量约为NFs的2.1倍。4.CAFs和NFs细胞蛋白表达,CAFs高表达α-SMA,FAPα,而NFs细胞表达阴性。CAFs和NFs细胞均高表达Vimentin。
结论:从新鲜的活体组织分离、培养获得的细胞抗原丢失少,与体内细胞更为接近。本研究成功分离培养CAFs,在肿瘤相关成纤维胞的来源、干细胞特性、耐药性研究中有重要意义。同时为进一步研究该细胞的生物学特性及CAFs与肿瘤细胞的相互作用提供了良好的基础。CAFs促进肿瘤细胞增殖、转移、血管生成等作用机制仍需进一步探讨。