[目的]芥子气(SM)是一种具有高亲电活性的双功能烷基化毒剂,曾在多次战争及恐怖袭击中使用,并且至今仍具有极大的潜在威胁[1].目前国际上关于芥子气毒理机理的认识仍不明确,然而国际公认对DNA烷基化是其毒性作用的始发机制与物质基础：DNA分子的烷基化可影响复制、转录或造成DNA链断裂等,严重时细胞死亡；与此同时有研究认为芥子气体内代谢产生的自由基对DNA的氧化损伤亦同时或更早发生,是芥子气毒性的重要组成[2].鉴于此,本研究旨在建立新的高灵敏质谱分析方法同时定量检测DNA烷基化及氧化损伤的生物标志物,以尿液为检测样本,考察动物在芥子气暴露后不同时间点二者的含量变化,研究其时效、量效关系及其相关性,以期从分子水平研究二者在毒剂的溯源检测分析以及毒性机制研究中的作用,最终更好得辅助临床诊断救治方案的制定.[方法]目前主要的SM-DNA加合物有四种：鸟嘌呤N-7位单取代加合物(N7-HETEG)、双取代加合物(Bis-G)、O-6位单取代加合物(O6-HETEG)以及腺嘌呤N-3位单取代加合物(N3-HETEA),DNA氧化损伤标志物最主要为8-OH-Dg.本研究建立了同时检测以上五种不同功能的生物标志物的高灵敏SPE-UPLC-MS/MS方法,对不同剂量芥子气皮肤染毒SD大鼠的尿液中SM-DNA加合物及8-OH-Dg进行检测,方法检测限为5 ng/L.[结果与讨论]检测结果显示(图1)两种不同类型的生物标志物呈现显著差异的时效、量效关系：染毒12 h五种生物标志物均可检出,且8-OH-Dg存在体内本底(＜20 ppb)不适宜作为溯源性标志物；毒剂暴露12 h后DNA加合物含量随时间逐渐降低,8-OH-Dg则呈现迅速升高随后降低趋势,提示体内DNA分子的烷基化损伤应早于氧化损伤发生；量效关系方面,DNA加合物浓度具有明显的剂量依赖关系,而8-OH-Dg未呈现剂量依赖关系,提示SM-DNA加合物可作为芥子气损伤的溯源性标志物以及良好的内暴露效应标志物；而氧化损伤标志物则无法定量指示毒剂的内暴露情况.