中度嗜盐菌玫瑰色库克菌ZJUQH相容性溶质分子挖掘及其生理功能研究

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嗜盐微生物能抗衡外界的高渗透压胁迫,适应高渗透压生长环境,其中中度嗜盐细菌主要依靠相容性溶质机制来适应高盐环境。本研究以从青海湖中分离到的玫瑰色库克菌ZJUQH为对象,借助UPLC和HPLC-MS对该中度嗜盐菌胞内主要的相容性溶质进行鉴定解析,研究发现其分子量为204,分子式为C11H12N2O2,结合碎片数据和生理特性,推测该分子为L-色氨酸;基于固态平板和液态培养实验发现,其盐敏感突变菌株在高盐平板上生长非常缓慢,而在高盐培养环境中添加0.2 mmol的色氨酸或2 mmol色氨酸对盐敏感突变菌株的生长具有明显改善效果;基于液体培养研究发现,添加色氨酸能改善突变菌的生长状态。通过比较分析突变菌株在不同盐度协同添加2 mmol、5mmol色氨酸下生长情况验证其相容性溶质生理功能,发现在培养第4天时,添加2 mmol色氨酸能提高突变菌的存活率,这说明适宜浓度的相容性溶质能有更好的提高耐盐能力;随后通过对比添加或不添加2mmol色氨酸突变菌的生长性能,结果显示30 g/L、40 g/L、50 g/L盐度下,色氨酸都能一定程度地改善突变菌的生长,存活率提高到2.153、2.513、1.359;最后,借助泌乳手段分离得到该耐盐菌的胞内小分子物质,通过纯化和HPLC再次验证该物质为色氨酸,利用NMR进一步分析该物质的结构特性,为该菌相容性溶质的分子功能解析与应用提供了研究基础。
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