【摘 要】
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目的：利用激光共聚焦显微镜中的荧光共振能量转移(FRET)技术来验证整合素4结合蛋白(ITGB4BP)和P311间的相互作用.方法：分别构建能在哺乳动物细胞中表达ITGB4BP的绿色荧光融
【机 构】
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第三军医大学西南医院烧伤研究所 创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室 重庆400038
【出 处】
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中华医学会烧伤外科学分会2009年学术年会
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目的：利用激光共聚焦显微镜中的荧光共振能量转移(FRET)技术来验证整合素4结合蛋白(ITGB4BP)和P311间的相互作用.方法：分别构建能在哺乳动物细胞中表达ITGB4BP的绿色荧光融合蛋白ITGB4BP-EGFP和表达P311的红色荧光融合蛋白P311-DsRed的重组载体plTGB4BP-EGFP和pP311-DsRed,经酶切与测序鉴定正确后,共转染人胚肾293 (HEK293)细胞48小时后,采用受体漂白方法(P311-DsRed),检测ITGB4BP和P311间的能量转移率(E)和相互间的作用距离(R). 结果：重组载体pITGB4BP-EGFP和pP311-DsRed经双酶切鉴定正确,转染293细胞后经激光共聚焦显微镜观察能分别表达融合蛋白ITGB4BP-EGFP和P311-DsRed,在胞浆和胞核中存在着共定位,FRET检测发现其能量转移率为14％,两个分子间的作用距离为6.3nm.结论：成功构建了ITGB4BP-EGFP和P311-DsRed融合蛋白真核表达重组载体,在哺乳动物细胞中进行了表达后,利用FRET技术证实活体细胞内ITGB4BP和P311 间存在着相互作用.
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