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目的:利用转基因细胞法建立抗HER2单抗的抗体依赖的细胞介导细胞毒效应(Antibody-De-pendent Cell-mediated Cytotoxicity,ADCC)的生物学活性检测方法.
方法:利用Jurkat/NFAT-luc+FcγRⅢα转基因细胞系作为效应细胞,SKBR3细胞系作为靶细胞,通过荧光素酶检测系统(BioGloTM Luciferase Assay sys-tem)进行抗HER2单抗的ADCC生物学活性检测,并对试验条件进行优化及方法学验证,并将该检测方法用于不同类型的抗HER2单抗的ADCC效应的评价.
结果:抗HER2单抗在该方法中存在量效关系,且符合四参数方程式:y=(A-D)/[1+(x/C)B]+D,方法经优化后确定靶细胞为SKBR3细胞,抗体稀释起始浓度为4000ng·mL-1,1:4倍的稀释倍数,效靶比为15:1,诱导时间为20h.该方法具有良好的专属性;3次独立检测的日内及日间最大FI值及EC50值的变异系数均小于10％;4个不同稀释组回收率样本经3次测定,相对效价分别为(46.27±2.01)％、(71.18±1.55)％、(133.17±9.91)％以及(166.55±15.73)％;对应回收率分别为(92.53±4.01)％、(94.91±2.07)％、(106.54±7.93)％、(111.04±10.48),变异系数CV(％)均小于10％,且该方法也适用于不同变性程度及各类抗HER2单抗的ADCC效应的评价.
结论:本研究利用转基因细胞法成功建立抗HER2单抗ADCC生物学活性检测方法,该方法专属性强、重复性好,准确性高,可作为抗HER2单抗ADCC生物学活性的常规检测方法.